삼성바이오, 셀트리온 합격을 위한 동물세포 공학 관련 기본 지식 2

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본문내용

 Transient expression system (TGE) in mammalian cells

공정의 핵심: 균일, 균질, 단순.

Stable Expression
- Viability가 높게 유지됨
- 2-6 months: 여러가지 방법론을 통해 시간 단축 가능. 증폭 system 활용 시 여전히 오래 걸리긴 함.

Transient Expression
- Transfection 이후, Viability가 떨어짐.
-  CD-media adaptation
- 단점: scale-up이 어렵다.
- Rapid production, Simple process, Cost effective
 High-throughput screening, Screening drug candidates, Early stage evaluation, Assay development, Pre-clinical assessment

<중 략>

 Gene amplification system – dhfr & MTX

-dhfr/MTX system은 dhfr 유전자를 knock-out 시킨 세포주에 dhfr-Gol vector와 selection marker vector를 도입한 후 MTX 물질을 통해 유전자를 증폭하는 시스템을 말함.
-Dhfr 유전자를 knock out 시키면 세포의 de novo pathway는 block되고 salvage pathway로 생존할 수 밖에 없는데, 이 때 hypoxantine이나 thymidine을 배지에 넣어주지 않게 되면 dhfr knock-out 세포는 자연스레 죽게 됨. 여기에 dhfr vector를 도입하면 selection이 가능하게 되고, 이 때 MTX를 처리하면 stress에 의해 gene rearrangement가 발생함. MTX의 농도를 점점 더 강하게 처리할수록 더 많은 gene rearrangement가 발생하고 이에 따라 gene copy가 늘어나게 되어 q값이 증가함

참고 자료

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