콩 β - Conglycinin 의 대장균 발현과 정제
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서지정보
ㆍ발행기관 : 한국식품영양학회
ㆍ수록지정보 : 한국식품영양학회지 / 12권 / 2호
ㆍ저자명 : 지현정, 남은숙, 박신인
ㆍ저자명 : 지현정, 남은숙, 박신인
한국어 초록
콩 단백질은 글리시닌과 β-콘글리시닌을 주요 성분으로 하며, 콩 β-콘글리시닌이 나타내는 알레르기 원인과 콜레스테롤 저하 작용을 밝히고저 유전자 공학적인 방법을 시도하였다. 즉 β-콘글리시닌의 α-subunit를 유전자 클로닝하고 대장균에서의 발현시스템을 구축하였다. 발현벡터는 pET21d이며 플라스미드를 구축하여 E. coli BL21(DE3)에 형질전환시켰고 발현된 단백질은 균체전체 단백질의 15%이며 90%이상이 가용화 상태로 축적되었다. 축적된 발현 단백질은 천연의 β-콘글리시닌과 동일한 트리머로 확인되었다. 발현 단백질은 20∼40% 황산암모늄 분별침전과 Q-Sepharose 이온교환크로마토그래피, Butyltoyopearl 소수성 컬럼크로마토그래피로 정제하였다. 이것은 콩단백질의 기능특성을 규명하는데 필요한 대장균 대량 발현계를 확립하고 발현 단백질의 정제방법을 확립한 결과이다.영어 초록
Soybean protein consists of two major components β-conglycinin and glycinin, which together constitute 70% of the total seed storage protein at maturity. β-Conglycinin is a trimeric glycoprotein and formed by the assembly of various combinations of three subunits, α, α´and β, which have molecular weights of 69, 000, 72, 000 and 42, 000, respectively. Recently, β-conglycinin was identified as powerful LDL lipoprotein receptor activation, hypercholesterolemia and major allergenic proteins. To investigate these reasons, we constructed an expression system of cDNA encoding α-subunit of β-conglycinin in Escherichia coli and purified the expressed protein. The pro-β-conglycinin sythesized in Escherichia coli BL 21 (DE3) comprised approximately 15% of the total bacterial proteins and the expressed protein are formed soluble and trimer such as native protein in Escherichia coli cells. The highly expressed protein was purified to homogeneity by salt precipitation with 20∼40% ammonium sulfate, ion-exchange chromatography with Q-sepharose and hydrophobic column chromatography with Butyltoyopearl.참고 자료
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