단백질정제

소개글

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목차

Ⅰ. 분리정제의 원리
⑴ 분리 기술 - 분획 원심분리, 밀도구배 원심분리
⑵ 정제 - 염석, 투석, 크로마토그래피, 전기영동

Ⅱ. 순수분리 된 단백질의 아미노산 서열 결정 방법
⑴ 교차결합의 절단과 사슬의 분리
⑵ NH2-말단(N-말단)아미노산 결정법
⑶ COOH말단(C-말단)아미노산 결정법
⑷ 펩티드 결합의 효소에 의한 분해

Ⅲ. 아미노산 조성

Ⅳ. 분자량 측정방법
⑴ Kjeldahl method
⑵ Biuret test
⑶ Lowry method
⑷ 분광학적 정량법
⑸ bradford mehod

Ⅴ. 생리생화학적 특성

- 참고문헌 -

본문내용

1. 분리정제의 원리
⑴ 분리 기술
분리 기술 - 연구할 단백질의 생물 대상체를 선택하여 세포균질액을 준비한다. 이때, 세포 의 종류에 따라 파괴법이 다른 데, 그 방법으로는 막자사발 이용, 압력 가하기, 전기 균질 기 사용, 가수분해효소 사용, 초음파 사용 등으로 세포막을 파괴한 후 세포내 물질을 준비 한다.

1) 분획원심분리(differential centrifugation)
세포 균질액 분획, 이 방법으로 정제하려는 단백질이 주로 발견되는 세포 분획을 먼저 분리해내고 이 분획을 이용해서 다시 순수 분리한다. 처음 균등액을 낮은 속도(700~1,000×g)로 10~20분간 원심분리하면, 무거운 입자인 핵과 부서지지 않은 세포가 침전된다. 그리고 미토콘드리아와 리소좀처럼 가벼운 입자는 침전물 바로 위 용액인 등장액 속에 부유하게 된다. 그 다음 등장액을 다른 원심분리관에 옮겨 더 높은 속도(15,000~20,000×g)로 10~20분간 원심분리하면 침전물 속에 미토콘드리아, 리소좀, 퍼옥시좀 등이 들어있게 된다. 마이크로좀을 포함하는 등장액을 다른 원심분리 관에 옮기고 100,000×g에서 60~120분간 원심분리 한다. 그 결과 마이크로좀(소포체단편)은 침전물 속에, 그리고 리보솜과 여러 세포막, 글리코겐 같은 과립은 등장액 속에 있게 된다. 등장액 속에 있게 된다. 마지막 등장액을 200,000×g에서 2~3시간 원심분리하면 리보솜과 고분자들이 침전물 속에 나타난다. 이때 상등액에는 단백질이 많이 포함된 세포질만이 남게 된다.
2) 밀도구배원심분리 (density-gradient centrifugation)
밀도구배원심분리에서는 편차원심분리 경우와 다르게 균질 용액 대신에 밀도기울기를 이용한다. 용액의 밀도는 튜브 아래로 내려갈수록 증가하기 때문에 원심분리 중의 대류(convection)에 의한 혼합을 방지할 수 있다. 밀도기울기 원심분리에는 속도침강원심분리와 등밀도원심분리의 두 가지 형태가 있다.

참고 자료

한국생화학회(2002), 실험생화학, 탐구당, p.700
곽한식 역(2007), 생화학, 라이프사이언스, p.702
김의락 외11인, 최신생화학, 형설출판사, p.479
박인국, 생화학길라잡이, 라이프사이언스, p.559
Campbell, Mary K, 생화학, 淸文閣, p.586
박인원 역, 생화학(상), (주)서울외국서적, p.490