PCR(Polymerase Chain Reaction)

소개글

연쇄중합효소 반응 인 PCR 실험

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion

본문내용

1. Abstract
이 실험은 전 실험에서 당근 잎에서 분리한 genomic DNA를 이용하여 이 DNA의 특정 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관 내에서 원하는 분자를 증폭시키는 방법인 PCR실험이다. 이번 실험을 통해 우리가 원하는 gene을 찾아 원하는 만큼의 양으로 증폭 시킬 수 있다. 또한 각 실험마다 다른 primer를 사용해 PCR을 할 때 어떤 primer를 사용해야 하는지 알아볼 수 있다.
실험은 멸균된 PCR tube에 D.W. 12.5μl, 10x buffer 2.0μl(환경조건을 맞추기 위해 사용), dNTP 2.0μl(에너지 역할, 블록역할, 염기가 들어간다.), 각 primer(원하는 곳에 Polymerase가 붙어 복제시키는 역할) 1.0μl×2, 당근 잎에서 분리한 genomic DNA 즉, Template DNA 0.5μl, DNA Polymerase 1μl를 순서대로 넣어서 총 20μl를 만들어준다. 그리고 Denature, Annealing, Extention을 해주기 위해 각 조건에 맞도록 PCR을 해준다. 마지막으로 1% agarose gel을 만들어 전기영동 한 후 전기용동 사진을 확인한다.
전기영동 사진을 봐서 결과를 내리면 당근 HSP17.7 gene의 primer를 사용한 것은 500bp보다 아주 약간 작았고(480~490bp로 예측 가능), 당근과 다른 gene의 primer인 Dc actin를 사용한 것은 500bp였고, 전혀 다른 primer인 XOO4288를 사용한 것은 전기영동 사진에서 나타나지 않았다.
이 실험으로 target DNA를 증폭시키려면 Template DNA, primer, dNTP, DNA Polymerase가 필요하다는 것을 알았고 primer는 target DNA의 염기서열에 상보적인 primer를 사용해야 target DNA를 증폭시킬 수 있다는 것을 알 수 있고 primer의 염기서열에 따라 합성되는 DNA의 크기도 약간 씩 달라 질 수 있다는 것을 알 수 있다.

2. Introduction
- PCR(polymerase chain reaction) 이란 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관 내에서 원하는 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하 여 많은 양(105-108배)의 DNA 합성이 가능하다. 즉, genomic DNA와 같은 아주 큰 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 일반적으로 사용되는 agarose gel이나 polyacrylamide gel 상에서 뚜렷하게 보이는 band로 가시화 할 수 있다.
PCR이 이용되는 실험으로는 probe로 사용할 목적으로 cloning된 이중가닥 DNA의 증 폭, 적은 양의 mRNA로부터 특정 cDNA의 cloning, DNA sequencing, 돌연변이 검사, 병인성 바이러스 및 박테리아 검출 실험이 있다.

참고 자료

①http://ask.nate.com/qna/view.html?n=6159400
②www.takara.co.kr/pcr_down/pcr_01.pdf
③www.takara.co.kr/pds/magazine/pdf/38/qna.pdf