로리법에 의한 단백질(카제인) 정량

소개글

1. 흡광광도계의 사용법을 마스터한다.
2. micro 피펫의 사용법을 마스터한다.
3. 검량선을 사용한 비색법에 의한 물질의 정량법을 마스터한다.
4. 시약의 제조법을 이해하고 익숙해진다.
5. 천칭의 사용법에 익숙해진다.

목차

1. 실험제목
2. 실험날짜
3. 실험목적
4. 실험원리
5. 시약 및 기구
6. 실험방법
7. 결과
8. 고찰
9. Q & A

본문내용

1. 실험제목
로리법에 의한 단백질(카제인) 정량

2. 실험날짜
2007년 11월 16일

3. 실험목적
1. 흡광광도계의 사용법을 마스터한다.
2. micro 피펫의 사용법을 마스터한다.
3. 검량선을 사용한 비색법에 의한 물질의 정량법을 마스터한다.
4. 시약의 제조법을 이해하고 익숙해진다.
5. 천칭의 사용법에 익숙해진다.

4. 실험원리
Lowry법에서 생기는 청색은 뷰렛반응에서와 같이 Cu2+이 펩티드 결합과 반응하는 데 기인되며, 포스포몰리브덴산을 함유하는 착화합물 시약(페놀시약, Folin 시약, Lowry 시약, Folin-Ciocalteau 시약)을 단백질에 있는 티로신과 트립토판 잔기들이 환원하는 데도 기인된다. 이 방법의 감도는 10~200㎍의 단백질량이다. 한국생화학회 교재편찬위원회 저, 1994, 신판 실험생화학, 탐구당, p.256

- Lowry법
단백질 정량에 있어서 Lowry법의 감도는 비교적 넓게 적용되기 때문에 오랫동안 광범위하게 이용되고 있다. 이 방법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu+이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. 발색의 정확한 기작은 밝혀지지 않았지만 Cu+ 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 phospomolybdotungstate를 푸른색의 heteropolymolybdnum으로 환원시킨다. 이러한 반응 결과 강한 푸른색을 생성하며 그 강도는 tryptophan과 tyrosine양에 영향을 받는다. 이 방법은 단백질의 농도가 0.01~ 1.0mg/ml의 경우에 측정가능하다. http://blog.naver.com/pregio77?Redirect=Log&logNo=150003114097

- 뷰렛반응
단백질이나 펩티드를 검출하는 반응으로 뷰렛 구조가 2가의 구리 이온과 반응하여 보라색의 착화합물을 형성하여 용액의 색깔이 보라색으로 변하는 특성을 이용한다. 단백질 뿐 아니라 단 몇개의 펩티드 결합을 가지고 있는 펩티드도 뷰렛 반응을 통해 검출할 수 있다.

참고 자료

한국생화학회 교재편찬위원회 저, 1994, 신판 실험생화학, 탐구당, p.256
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