단백질 정제(결과)

목차

◆ Abstract
◆ Introduction
◆ Material
◆ Result
◆ Discussion

본문내용

◆ Abstract


이번 실험은 재조합 plasmid가 삽입된 재조합 대장균을 배양하여 단백질을 생산하는 실험이었다. 이번에 사용된 균주인 대장균은 벡터의 삽입이 비교적 간단하고 단백질의 생산하는데 가장 많이 이용되고 있는 균주이다. 우리는 이러한 대장균에 벡터를 삽입하여 재조합 대장균을 만든 뒤 배양하였다. 배양된 대장균은 대수기에 억제된 단백질 합성을 유도하기 위해 단백질 합성 유도체인 IPTG를 이용하였다. 그 후 일정 시간이 흐른 뒤에 세포를 모은 위에 세포를 Sonication를 이용해 분쇄한 뒤에 TALON® IMAC System를 이용하여 재조합 대장균에서 생산된 단백질을 분리 하였다.





◆ Introduction


미생물을 단백질 생산은 1929년에 공팡이가 항생제를 생산한다는 것을 발견한 후로 항생제를 박테리아나 균류를 통해 대량 생산하기 시작 되었다. 그러나 이러한 단백질 합성 방법은 미생물에게서 자연적으로 합성되는 물질들에 한정되어 있고 고등생물에 의해서 생성되는 물질들에는 한계를 보여 왔다. 하지만 유전자 클로닝을 이용한 생명공학의 발전으로 고등생물에게서 발현되는 물질을 미생물을 통해 생산할 수 있게 되었다. 이번 실험에서는 대장균(E.coli XL1- bloe)에 삽입된 벡터 ( pET-23d-TRAIL)룰 통해 단백질을 생산시키고 수확하는 실험 이였다.



◆ Material

․ LB broth
실험실에서 가장 흔히 사용되는 배지이다.
균 배양 실험에 가장 흔히 쓰이는 LB배지는 Luria - Bertani media 에서 머리글자만 따온 것이다. 배지를 구성하는 물질 조성비율은 tryptone 10g/liter, NaCl 10g/liter, yeast extract 5g/liter 인데, 간단히 LB배지에는 트립톤과 이스트, 염화나트륨이 함유되어 있다고 보면 된다.
LB배지는 이 세 가지 물질을 증류수에 넣어 녹여 만드는 것인데, 요즈음에는 이 시료들을 따로 양을 재서 섞고 만들지 않아도 된다. 이미 약품회사에서 완제품을 판매하고 있기 때문에 그 것을 증류수와 섞어주기만 하면 된다. LB가루를 물(오로지 증류수만 쓴다)에 섞을때는 물 1L에 가루 25g이라는 철칙이 따른다.

참고 자료

- 생물학-생명의 과학, 로버트 A. 월리스, 을유문화사, 1993, pp.81~90.

- 단백질 대사, 김해리 최정희, 서울대학교출판부, 2001, pp.111-116, 120-122.

- 분자생물학, David Freifelder, 아카데미서적, 1999, 216-219.

- 생화학의 이해, 로드니 보이어, 월드사이언스, 2004, pp.352-359.

- 미생물학, 김명민 외 8, 라이프사이언스, 2005, pp.323-325.

- 유전공학의 원리, 심웅석, 고려대학교 출판부, 1993, pp.219-226.

- 단백질 실험노트, 김승호, 장규태 역, 월드사이언스, 2006, pp.153-155.