단백질 추출을 위한 전단계 (단백질의 과잉 발현 유도)

소개글

단백질 추출을 위한 전단계 (단백질의 과잉 발현 유도)

목차

실험 일시
실험 주제
실험 과정 :
실험 이론

본문내용

실험 과정 :
1. Shaking incubator에서 시료를 꺼내고, 8ml를 빈 tube에 유리 피펫으로 넣는다.
시료에는 항생제 2종류와 그에 내성을 가진 Ecoli(BL21)이 들어있다. BL21은 pREP4와 pQE9 plasmid를 가지며 각각 kanamycin과 Ampicillin에 resistant하다. Shaking incubator를 이용하는 이유는 shaking을 통해 airation이 일어나서 균이 잘 자라도록 하려는 목적이 있다.
2. 1.5ml E-tube 2개를 준비한다.
3. 뚜껑에 조이름, sampling한 순서를 namepen으로 적는다.
4. E-tube에 1ml씩 넣는다.
알코올 램프는 주변 공기(공중 낙하균)을 멸균하는 역할을 한다. 따라서 실험은 알코올 램프 반경 15~20초 이내에서 이루어지는 것이 좋으며, tube를 열 때에도 멸균을 위해 알코올 램프에 한 번씩 갖다댄다.
5. 30초~1분동안 원심 분리를 해서 균체를 가라 앉힌다.
6. 배지를 다 버린다.
배지를 버릴 때, 대장균 감염에 주의한다. 실험에 사용되는 대장균은 biohazard하다. 그 이유는 대장균들끼리 pili를 이용하여 communication을 할 수 있기 때문에, plasmid를 가진 대장균이 plasmid가 없는 대장균에게 pili를 통한 정보전달을 해줌으로써, plasmid가 없던 대장균도 복제 system으로 plasmid를 복제할 수 있게 되기 때문이다.
7. 통에 다시 담는다.

참고 자료

없음