[일생실] GFP 관찰

소개글

GFP 형광물질 관찰

목차

1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 실험 원리
4. 실험 재료
5. 실험 방법
6. 실험 결과
7. 실험 후 고찰
8. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 제목
GFP 관찰

2. 실험 목적
GFP를 이용하여 세포 내 도입시켜 형광 현미경으로 GFP를 관찰한다.

3. 실험 원리
Transfection 방법으로 DNA를 동물 세포에 도입시키며 DNA는 GFP가 삽입된 plasmid를 사용한다.

4. 실험 재료
세포 배양액 (DMEM), 293 T cell line, CaCl2, 2X HBS, D.W.

5. 실험 방법
① Cell planting: 293T cell을 12well plate에 1.2*105cell/well로 넣어준다.
② Transfection:
16~18시간이 지난 뒤 cell fluence가 60~80%인 지 확인
{DW 63.7㎕, DNA(GFP) 1㎕, CaCl2 9.3㎕}, 2XHBS 75㎕를 vortexing하면서 혼합한다.
③ Incubation: mix된 것을 Room Temperature에서 20min incubation 한다.
그 뒤 깔아둔 12well plate에 drop으로 떨어뜨려준다.
④ 6hr이 지난 뒤 DMEM으로 media change를 해 준다.
⑤ 형광현미경 관찰로 어느 정도 ENA-GFP 가 들어갔는 지 확인한다. (transfection 효율)

참고 자료

www.wikipedia.org