효소 활성 분석- Enzyme Kinetics(효소 반응 속도론).

소개글

효소 활성 분석- Enzyme Kinetics(효소 반응 속도론)에 관한 실험보고서(예비, 결과 합본)

목차

Abstract.
Introduction.
Material & Method
Result
Discussion
Reference

본문내용

Abstract.
이번 실험은 기질인 ONPG와 효소인 β-galactosidase를 이용해서 기질의 농도, 온도, PH가 효소 촉매 반응 속도에 어떤 영향을 주는지 알아보는 실험이었다. 기질의 농도(50,100,150,200,250uM), 온도(0,15,30,45,60℃), PH(PH 5 PH7.7, PH 9)등의 조건을 달리하여 기질인 ONPG가 효소인 β-galactosidase의해 분해되어 ONP가 나타내는 노란색을 띄는 것을 바탕으로 흡광도를 측정하여 분해정도를 알아낼 수 있었다. 또한 이렇게 얻어낸 흡광도를 바탕으로 효소반응속도론인 Michaelis-Menten equation과 Lineweaver-Burk equation으로 효소-기질간의 적합성여부를 나타내는 Km과 반응의 초기속도를 나타내는 Vo, 기질을 더 늘렸는데도 초기속도 Vo에 변화가 없는 직선의 기울기인 Vmax의 값을 구할 수 있었다. ONP의 농도를 통해 추세선을 표시하여 초기속도인 Vo를 구할 수 있었으며Vmax = 4.462uM/min와 Km = 100.07uM를 계산을 통해 구할 수 있었으며 온도와 PH는 초기반응속도가 가장 빠른 30℃와 PH 7.7에서 효소의 활성화가 가장 잘 이루어짐을 관찰 할 수 있었다.

Introduction.
효소의 활성은 효소농도, 기질농도, 기질이 효소작용을 받는 난이성, 조효소의 농도, allosteric effect, 저해물질의 존재와 그의 농도나 형태, 이온 강도, pH, 온도, 반응개시 후의 시간 등에 지배된다. 이 지표들이 각각 어떻게 효소 활성에 영향을 주는 가를 아는 것이 효소 반응속도론이다. 기본적인 효소 화학반응의 6가지 type은 다음과 같다.
- Oxidoreductase : 수소이온 혹은 전자를 전달하여 기질을 산화 혹은 환원시킴.
- Transferase : 기질의 특정 group을 다른 기질로 전달시킴.

참고 자료

한국생화학회, 실험생화학, 개정 3판, 탐구당, 1997, pp. 229~238
Rodney F. Boyer, Modern Experimental Biochemistry, The Benjamin/Cummings Publishing Company, 1993, pp. 436~442
Michael L. Shuler and Fikret Kargi, Bioprocess Engineering, Prentice-Hall, Inc, 1992, pp. 336~339