시료준비와 단백질 정량

소개글

생화학 실험의 시료준비와 단백질 정량

목차

실험결과
1. BSA 표준 단백질의 흡광도 측정 결과
2. BSA 표준 단백질의 흡광도-단백질 농도 그래프
3. 시료의 흡광도 측정 결과
4. 시료의 측정된 흡광도를 이용하여 다음을 계산한다.
5. 실험을 통하여 얻은 결과를 설명하시오.

토의

본문내용

5. 실험을 통하여 얻은 결과를 설명하시오.
BSA표준단백질의 양을 1㎍, 2㎍, 3㎍, 4㎍으로 늘여가며 파장 595㎚에서 흡광도를 측정하였다. 실험값으로 standard curve를 얻었으며 흡광도를 x, 단백질 농도를 y로 놓았을 때 다음의 2차방정식을 얻을 수 있었다. y = 29.83x2 + 3.76x + 0.63. R2값은 0.9976으로 1에 거의 근접했으므로 좋은 결과를 얻었음을 알 수 있다. 따라서 미지의 단백질 시료의 흡광도를 측정한 후 식에 대입하여 쉽고 간단하게 단백질을 정량할 수 있다.
미지의 농도인 근원세포와 근관을 595㎚에서 흡광도를 측정하였을 때 각각 0.226, 0.258의 값이 나왔다. 위의 방정식에 대입하여 단백질의 농도를 구하였다. 실험결과 근원세포의 단백질 농도 y₁ 는 {29.83x(0.226)2 }+ (3.76x0.226) + 0.63=3.003㎍ 이고 2㎕의 시료를 취했으므로 1㎕의 시료안의 단백질 함량은 1.50㎍이 된다. 근관의 단백질 농도 y₂는 {29.83x(0.258)2 }+ (3.76x0.258) + 0.63=3.586㎍ 이고 2㎕의 시료를 취했으므로 1㎕의 시료안의 단백질 함량은 1.79㎍이 된다. 근원세포에 비해 근관이 단백질양이 많은 것을 볼 수 있다.
전기영동용 시료를 준비하기위해 근원세포와 근관의 단백질이 15㎍씩 시료에 첨가되도록 하기 위하여 농도=질량/부피 식을 이용하여 계산하였다. 각각 10㎕, 8.38㎕가 들어가고 완충용액과 버퍼를 넣어주어 20㎕의 용량을 맞춰 주었다.

참고 자료

1.단백질 실험노트 상. 2001. 김승호 외. 월드사이언스. 5~39p
2.신판 실험생화학. 1989. 한국생화학회 교재편찬위원회. 탐구당. 230~231p, 255~257p.