생화학 실험 2 전반부 : 5주차 : Subcloning 2: detection of subcloning
- 최초 등록일
- 2009.10.05
- 최종 저작일
- 2008.04
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소개글
연세대학교 생화학 실험 2 전반부 5주차 실험에 대한 리포트입니다.
목차
1. 실험 제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동실험자:
4. 목적
5. 원리
6. 시약 및 기자재:
7. 방법:
8. 결과:
9. 고찰
본문내용
* Plasmid에 대해...
Plasmid는 본래의 DNA 이외에 가지고 있는 여분의 DNA로 크기가 1kb~200kb까지 다양하다. 대부분은 double strand이고 구형이다. 박테리아 세포로부터 superhelical form으로 isolated될 수 있다. 또, 박테리아의 종에 따라 다양한 종류의 plasmid가 관찰되기도 한다. 그들은 박테리아의 염색체와는 독립적으로 물려받고 복제될 수 있다. plasmid는 복제되고 전사되기 위해 숙주세포의 protein과 enzyme에 의존적이다. 세포 안에 5~1000copies가 있고 벡터로 사용될 수도 있다.
* Component of Plasmid vectors
1) Replication origin
Plasmid가 자가복제 할 때 처음 인식하는 부위이다
2) Antibiotics resistance gene
항생제에 내성을 갖는 gene
대개 ampicillin resistance gene을 가짐
Eukaryotic expression vector에는 대게 neomycin resistance gene을 가지고 있다.
3) Multiple cloning site(MCS)
몇 가지 제한효소 절단부위를 한꺼번에 모아놓은 부분(unique)
100~150bp 정도에 많은 절단부위를 갖는다.
* Extraction and Purification of Plasmid DNA
Bacteria로부터 plasmid를 얻는 방법은 몇 가지가 존재하지만 다음의 3 step은 동일하게 포함되어 있다.
① Growth of the bacterial culture : transformed 된 E.coli를 자라게 한다.
② Harvesting and lysis of the bacteria : transformed 된 E.coli를 모아서 터뜨린다.
③ Purification of the plasmid DNA : plasmid DNA를 정제한다.
참고 자료
①생화학 실험(Ⅱ) 2008년도 1학기 전반부 Basic Tools for Molecular
Cloning 연세대학교 생화학과
②Stryer Biochemistry Sixth Edition Freeman
③Naver and other Internet site
④조교님께서 제공해주신 PPT 자료