DNA elution - agarose gel로부터 DNA 분리

소개글

DNA elution - agarose gel로부터 DNA 분리
DNA elution은 DNA를 전기 영동하여 관찰되는 band 중에서 특정한 band를 gel로부터 유리해내는 과정이다. gel에서 DNA를 회수하는 많은 방법에는 low-melting temperature (LMT) agarose method, electroelution, high-salt extraction, freeze-squeeze 등이 있다. 그 중에서도 이번 실험에서는 high-salt extraction의 glass fiber 방법을 이용하여 고농도의 으로 gel slice를 녹여 spin column의 membrane에 DNA를 붙여서 분리해냈다. 이로써 비교적 깨끗한 DNA를 추출할 수 있었고, 또한 과정이 간편한 spin column을 이용하여 gel로부터 DNA를 elution할 수 있었다.

목차

Abstract:
Introduction:
Materials & Methods:
Result:
Discussion:
Reference:

본문내용

Abstract:
DNA elution은 DNA를 전기 영동하여 관찰되는 band 중에서 특정한 band를 gel로부터 유리해내는 과정이다. gel에서 DNA를 회수하는 많은 방법에는 low-melting temperature (LMT) agarose method, electroelution, high-salt extraction, freeze-squeeze 등이 있다. 그 중에서도 이번 실험에서는 high-salt extraction의 glass fiber 방법을 이용하여 고농도의 으로 gel slice를 녹여 spin column의 membrane에 DNA를 붙여서 분리해냈다. 이로써 비교적 깨끗한 DNA를 추출할 수 있었고, 또한 과정이 간편한 spin column을 이용하여 gel로부터 DNA를 elution할 수 있었다.
GB buffer(high salt buffer)로 gel slice를 녹여 solution상태로 만들고, DNA를 column의 glass fiber에 부착시키고, column을 spin down시켜 DNA만을 남겼다. 여기에 wash buffer를 넣어서 spin down을 2번 하고 마지막으로 EB buffer(low-salt buffer)로 column을 e-tube에 올려 최종적으로 깨끗한 DNA를 얻는 과정으로 이루어진 elution을 총 3번 시행하였다.
PCR로 증폭시켰던 DNA를 전기영동하여 얻었던 gel slice에서 DNA를 elution하고, 이로부터 insert를 얻기 위해 enzyme cut시켰다. 또한 pBluescript에 BamHⅠ 및 XbaⅠ처리를 하여 전기영동하여 준비해두었던 gel slice를 elution하여 vector를 얻었다. enzyme cut시켜두었던 DNA를 전기영동하여 필요한 band의 gel slice를 얻어 마지막으로 elution하였다. 이로써 이후 DNA ligation 실험에서 필요한 물질을 준비할 수 있었다.

Introduction:
molecular biology에서 gel extraction 또는 gel isolation은 agarose gel electrophoresis에서 얻은 DNA의 fragment를 분리시키는 기술이다. DNA sample이 agarose gel에서 running된 후에 extraction은 필요한 fragment를 인식, corresponding bands을 분리, 그

참고 자료

- 이동환, 유전공학, 문운당, 1991, pp.52~54
- KIST 생명공학연구소, 분자생물학노트, 1998, 도서출판한림원, pp.37 ~ 42
- http://enc.daum.net/dic100/contents.do?query1=20X2165654
- www.wikipedia.org