효소의 단백질을 정제해 활성 측정및 전기영동

소개글

크로마토 그래피를 이용해 효소의 단백질을 정제하고, 그 활성을 측정한 후 마지막으로 SDS-PAGE를 이용해 β-galactosidase를 분리해내는 실험 레포트

목차

Ⅰ.Introduction
Ⅱ.Result
1.β-galactosidase activity확인
2.SDS-PAGE
Ⅲ.Discussion

본문내용

Ⅰ.Introduction
크로마토그래피는 혼합물로부터 그 성분들을 순수하게 분리하거나 확인, 정량하는데 사용하는 편리한 방법 중의 하나로써 크기, 전하, 흡착성 또는 생물학적 친화성(affinity)의 차이에 근거를 두고 미세한 입자를 충전시킨 Column을 통하여 유체를 균일하게 침투 통과시키는 과정에서 유체 내 어떤 성분이 선택적으로 지연되어 결과적으로 물질이 분리되는 것을 말한다. 생물공정에서 많이 사용되는 것으로 크기의 차이에 근거를 두고 분리하는 겔 크로마토그래피, 이온교환수지의 흡착성을 기준으로 하는 이온교환 크로마토그래피, 분자간의 친화성에 근거를 둔 친화성 크로마토그래피가 있다. 이외에도 용질분자와 지지체 위의 작용기 사이의 소수성 상호작용에 기초한 소수성 상호반응 크로마토그래피, 그리고 크로마토그래피의 일반 원리에 기초한 종이 크로마토그래피, 얇은 막 크로마토그래피, 기체 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피 등 여러 가지가 있다.
이중 우리가 실험하는 β-galactosidase 정제에는 이온교환 크로마토그래피를 이용한다. 아미노산 양이온은 수지(resin)에 정전기적으로 결합하는데, 이온교환 크로마토그래피는 아미노산(혹은 다른 이온)이 완충된 염용액과 경쟁을 하면서 이온수지 칼럼을 통하여 용출되는 과정을 말한다.
이온교환 크로마토그래피는 친화성 크로마토그래피와 논리적으로 유사하며, 두 가지 크로마토그래피는 모두 원하는 단백질에 결합하는 column 수지를 사용한다. 그러나 이온교환 크로마토그래피에서는 상호작용이 친화성 크로마토그래피보다는 덜 특이적이어서 알짜 전하에 근거하고 있다. 이온교환 수지라면 양전하나 음전하를 띤 리간드를 가지고 있을 것이다. 음전하를 띈 레진은 양이온 교환수지이고 양전하를 띈 수지는 음이온 교환수지이다. column은 처음에 적당한 pH와 이온강도를 가진 완충용액으로 평형화시킨다. 이온교환수지는 반대 이온과 결합되어 있다. 양이온 교환수지는 대게 Na+나 K+이온과 결합되어 있고, 음이온 교환수지는 대게 Cl-이온과 결합되어 있다.

참고 자료

없음