DNA ligation and Transformation

소개글

DNA 재조합을 목적으로 두 개의 DNA를 연결하는 원리를 배우고 외부 DNA를 vector에 접합시켜 transformation 시킨 다음 배지에 도말하여 DNA clone을 얻는 실험보고서

목차

1. abstract
2. introduction
3. material & method
4. result
5. discussion
6. reference

본문내용

Abstract
이번 실험은 DNA 재조합을 목적으로 두 개의 DNA를 연결하는 원리를 배우고 외부 DNA를 vector에 접합시켜 transformation 시킨 다음 배지에 도말하여 DNA clone을 얻는 것이다. vector와 insert의 비율은 1:4였고 DNA ligase를 사용하였다. 형질전환에는 초반 실험에서 만들었던 competent cell stock을 사용하였으며 blue white screening을 이용하기 위하여 X-gal과 ampicillin 및 LB를 포함한 배지에 도말하였다. 실험결과 blue colony와 white colony 어느 것도 생성되지 않았다. 따라서 실험은 실패한 것으로 판단된다. 다른 조의 실험 결과를 바탕으로 형질전환효율을 계산해보면 pBluescript을 c-cell에 transformation만 시킨 후 spreading 한 plate에서는 77개의 blue colony가 관찰되었고 형질전환효율(CFU/μl)=(77CFU/100pg)*(10pg/μg)*(1.0ml/0.1ml)*10=7.7*10이 되었으며 blue white screening 한 결과 blue colony 13개, white colony 25개가 관찰되었다.

Introduction
DNA의 재조합은 ligation을 통해 이루어지는데 ligation은 DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정을 의미한다. 이 반응에 이용되는 효소를 ligase라고 부르는데 DNA를 기질로 사용하는 ligase이면 DNA ligase라고 하며 RNA를 기질로 사용하는 ligase이면 RNA ligase라 한다. RNA ligase는 single strand DNA 또는 RNA끼리 연결하는 enzyme으로 5`-RACE와 같은 특별한 목적의 실험에서만 이용된다. 유전자 재조합 과정에서 이용되는 ligase는 주로 DNA ligase인데 이 효소는 prokaryote, eukayote, virus 등에서 유래한 것으로 현재 많이 이용되는 ligase는 T4 DNA ligase와 E.coli DNA ligase가 있다.

참고 자료

Watson, Molecular biology of the gene, CSHL Press, 2008, pp.127~130
심웅섭, 분자생물학, 월드사이언스, 2006, pp.386~387