소개글
MALDI-TOP를 이용한 펩타이드 정량분석 실험 보고서 입니다.
목차
1. Abstract & Introduction
2. Experiment
3. DATA and Result
4. Discussion
5. 참고문헌 및 각주
본문내용
1. Abstract & Introduction
우리의 몸은 단백질로 이루어져 있고, 각각은 몸 안에서 일어나는 반응이 산물이다. 따라서 인체를 연구하기 위해 가장 필수적으로 필요한 것이 단백질 동정과정이다. 이번실험에서는 주어진 세 개의 단백질인 Iysozyme, BSA(bouine serum albumin, 이하 BSA로 생략), ovalbumin 중에서 각 조에 할당된 단백질 sample을 동정하는 것이다. 여러 가지 동정과정 중에서도 질량분량법 중 하나인 MALDI-TOF MS방법을 이용할 것이다. 트립신으로 가수분해하고 얻어진 펩타이드들의 질량을 측정하고 그 값을 문헌에 나온 각각의 단백직들의 아미노산 서열에서 얻은 펩타이드 질량과 비교해 볼 것이다. 궁극적으로 이번 실험을 통하여 펩타이드 질량으로부터 단백질을 동정하는 방법과 MALDI-TOF MS방법의 원리, 역사, 기기 사용법 등을 알아 볼 것이다.
2. Experiment[1]
① 마이크로 피펫으로 1mg/ml 단백질 용액 50를 취하여 90℃ heating block에서
10분간 열처리하여 단백질의 가수분해가 잘 되도록 변성한다.
② 열처리한 단백질 용액에 트립신 용액(trypsin 0.1mg/10mM ammonium
bicarbonate 1ml) 50를 가하고 37℃ heating block에서 10분정도 가수분해한다.
③ 위의 단백질을 트립신으로 가수분해 한 펩타이드 용액(tryptic digest) 10에
메트릭스 용액(CHCA 10mg/0.1% trifluoroacetic acid in 1mL of ACN : H2O =
6 : 4) 10를 가하고 섞어준다. 용매, 휘발성 물질
참고 자료
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