Transfection,Transgenesis

소개글

Transfection,Transgenesis에 관한 생명공학 레포트입니다

목차

Transgenesis
형질전환 생쥐
Transfection

본문내용

2. 형질전환 생쥐
유전자 이식(Transgenic mouse)

유전자 이식이란 마우스의 유전체에서 특정 DNA를 삽입, 과발현시켜 native (혹은 endogenous)gene 처럼 대대로 유전되게 하는 기법으로 생체내 기능 연구 및 모델 생쥐 제작에 흔히 이용된다. 더욱이 tissue specific promoter를 이용하여 특정 조직 혹은 장기에서 원하는 시기에만 발현하도록 세밀하게 실험을 고안할 수 있다.

(1) DNA vector construction

특정 유전자를 수정란에 주입함으로써 그 유전자가 이식된 생쥐를 얻어내기 위해서는 원하는 DNA vector를 제작하는 것이 그 시작이다.

즉, ① 발현시키고자하는 gene (cDNA, genomic DNA, antisense DNA, dominant negative 등)을 선정해야 하는데, eukaryotic 혹은 mammalian gene인 경우 genomic DNA 나 cDNA를 사용하면 되고 polyA를 3`에 붙여주는 것이 보통이다. 기전은 잘 알려져 있지 않지만 cDNA 보다는 intron을 포함하는 genomic sequence가 expression이 더 잘된다는 보고가 있어, cDNA에 intron을 포함시켜 minigene을 만들기도 한다.

② 원하는 부위, 원하는 시기에 발현하도록 유도할 수 있는 적절한 promoter를 선정한다. 이때, cell line에서 expression이 확인된 promoter나 expression vector가 좋다. cloning vector의 종류는 실험에 큰 영향을 주지 않으며 대개의 경우는 pGEM이나 pBluescript 등을 사용한다.

참고 자료

없음