Composition for PCR with Pfu polymerase
- 최초 등록일
- 2010.03.20
- 최종 저작일
- 2009.11
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소개글
학교 도서관에서 자료를 찾아가며 썼기 때문에 principle이 알차고요,
실험고찰도 정말 단순히 감상문이 아니라 원리 중심으로 썼습니다.
이 자료보시고 꼭~ 좋은 학점 받으시길 바래요~
목차
#서론
1. PCR의 원리
2. Primer 설계
3. DNA polymerase
4. Pfu DNA polymerase
5. DNA, RNA 분석
#재료 및 방법
#결과 및 고찰
#참고문헌
본문내용
#서론
1. PCR의 원리
PCR(중합효소 연쇄반응)은 최근까지 이루어진 모든 분자생물학적 기술의 진보 중에서 매우 유용한 것으로 꼽을 수 있다. PCR의 목적은 특정한 DNA 염기서열은 증폭하는 것이다. 매우 적은 양의 DNA로 시작했다 하더라도, 그것이 검출만 가능하다면, PCR을 통해서 엄청나게 많은 DNA 카피를 만들 수 있다. 그 결과 PCR을 이용해서 의학적 진단, 유전적 분석, 유전적 설계 및 법의학적 분석에 사용되고 있다.
*PCR 단계
PCR의 단계는 Denaturation, Annealing, Extension의 세 단계로 이루어진다.
① Denaturation(95℃, 30sec) : targer DNA가 존재하는 template DNA를 Denaturation 을 한다. 이 때, 이중 가닥의 template DNA는 높은 온도로 인해 단일가닥으로 분리된 다.
② Annealing(50℃, 1min) : 반응액의 온도를 낮추고, 그로인해 두 종류의 primer가 단일 가닥의 DNA에 각각에 연결된다.
③ Extension(72℃, 3min) : 반응 온도를 DNA polymerase의 최적 온도를 높여주어, DNA 합성반응을 수행한다.
이 세 단계를 하나의 cycle이라고 칭하며, n회의 cycle을 행할 시, 배의 DNA가 증폭되
는 것으로 계산할 수 있으나, 실제로는 DNA polymerase 활성의 소실 등으로 인하여 실제 증폭되는 양은 이보다 낮다. PCR에서 DNA가 합성되는 과정을 1cycle과 2cycle의 그림을 통해 알아보자.
그림을 보면 알다시피, 1cycle에서 바로 target DNA가 만들어지지 않는다. primer가 연결된 template DNA부분에서부터 5’→3’의 방향으로 계속 extension 때문이다. 2cycle에서 template DNA를 비롯한 1cycle에서 만들어진 DNA에 primer가 연결되고 또한 5’→3’의 방향으로 extension 된다, 이때 1cycle에서 만들어진 DNA에서 extension된 DNA가 target DNA이다. 이런식으로, 계속해서 cycle이 진행되면서 우리가 얻고자 하는 target DNA의 수가 증가하는 것이다.
참고 자료
- 알기 쉽고 재미있는 분자 생물학 / David P. Clark, Lonnie D. Russell / 이명석 / p.271~275 / 2007년 / 라이프 사이언스
- 진단 분자생물학 / 강희규 외 8명 / p.180~195 / 2002년 / 현문사
- PCR 실험의 원리와 응용 / 최용락, 정수열, 이영춘 / p.1~9, p.25~38, p.47 / 2003년 / 세종출판사
- PCR 실험노트 / Taketoshi, Taniguchi / 지성길 / p.12~29 / 2002년 / 월드 사이언스