[분석 및 기기분석 실험] UV-Vis spectrophotometer

소개글

분석 및 기기분석 실험

목차

1. Introduction
2. Experimental
2. Data & Calculations
3. Results and Discussion

본문내용

1. Introduction
1) Objective or purpose
Bradford assay를 이용하여 단백질의 정량을 분석하는 방법을 배운다

2) Theory
단백정량실험 중 대표적인 것에는 Bradford assay와 Lowery assay가 있다. 둘 다 UV-Visible spectrophotometer를 이용, 흡광도를 측정하여 standard물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)을 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정하는 것이다. 차이가 있다면 흡광도 측정 전에 사용되는 시약및 그 시약에 따른 발색에 따라 측정되는 흡광도의 차이가 있다는 것이다. 방법적인 면에서는 어떤 단백질이든지 동일한 시약을 사용하는 Bradford assay가 더 간편하다. comassie grillant blue G-250을 샘플에 넣어 5분동안 반응시킨 후에 595㎚에서 측정하여 흡광도를 측정한다. 이런 발색을 이용한 정량법은 특히 시간의 흐름에 따라 결과값이 변하기 때문에 시간엄수가 매우 중요하다.

BSA standard란?
BSA는 대표적인 Blocking 물질에 속하는데 blocking물질이란 tissue나 cell의 표면에 비특이적인 반응에 대한 site를 antibody가 specimen에 첨가되기 전에 말그대로 block하는 물질을 의미한다. 이것은 tissue components나 resin material의 primary 혹은 secondary antibodies에 대한 결합에 대한 가능성을 감소시켜준다. Blocking reagents은 주로 primary antibody step전에 사용되며 각각의 step에서 buffer로 또한 사용될 수 있다. BSA(Bovine Serum Albumin)용액이란 지방산과 같은 다양한 lipid나 이 외의 기타 ligand와 결합할 수 있다. antibody와 같은 경우는 특정항원에 대해 binding을 할 때 특이성을 나타내지만 항원이외의 물질과 비특이성 결합을 할 가능성도 있다. 이러한 것을 방지하고자 항원과의 반응성에 대한 특이성을 증가시키도록 하기 위해, 비특이적인 물질과의 binding을 억제하기 위해서 BSA를 사용하는 것이다. 즉 BSA는 세포막이나 여러 세포내 물질과 결합하여 antibody의 비특이적 반응을 block한다.

참고 자료

대학 기기분석, 제1판, 기기분석 교재연구회, 자유아카데미, 2000, 257~258p
분석화학, 제8판, 분석화학 교재연구회, 자유아카데미, 2004, 823p
환경분석을 위한 기기분석, 제5판, 이용근, 동화기술교역, 1997, 151p