Isolation & characterization of bovine milk a-lactalbumin

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Isolation & characterization of bovine milk a-lactalbumin

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본문내용

1. a-lactalbumin은 우유에 포함된 major protein으로 milk sugar인 lactose의 합성을 조절한다. metal binding protein이다.

2. affinity chromatography
separation of protein on the basis of specific biological interaction
실험 상의 원리: IMAC 사용
IDA-agarose를 affinity support로 사용
이 실험에서는 a-lactalbumin을 구리 이온과 붙게 한다. (bead에 연결되어 있는 IDA가 구리 이온과 붙게 되는 것을 이용)

3. Bradford assay
protein에 Coomassie brilliant blue dye 가 붙게 되면 dye의 최대흡광도를 가지는 파장이 465nm에서 595nm가 된다.
이를 통해 a-lactalbumin의 농도 구한다. (추세선 사용)

4. UV spectrum
A280과 A260을 잰 뒤에 식을 사용
protein conc.(mg/ml) = 1.55A280 - 0.76A260

5. buffer B는 IDA 포함, buffer A는 IDA포함 안함
buffer A는 중간 중간에 unbound된 구리 이온이나, unbound된 효소를 떨어트리는 역할,
buffer B는 IDA와 a-lactalbumin이 서로 competition하여 affinity column에 붙어있던 효소를 떨어트리는 역할

참고 자료

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