전기영동 결과 리포트

소개글

우리가 실험한 전기영동은 음전하를 띠는 DNA의 성질을 통해 전기장을 이용하여 분리하는 방법인데, 크기나 모양이 같은 분자들은 이동속도가 같기 때문에 이동하면서 같은 분자들끼리 모여 분리가 일어난다. 제한효소를 DNA에 처리하면 원형의 플라스미드 DNA가 선형의 모양을 가지게 되는데 이러한 선형 DNA들은 양끝이 이어진 원형의 분자나 다른 복잡한 모양의 DNA분자들과는 달리 그 움직임이 단순하다. 일반적으로 super coiled DNA가 가장 빨리 이동하고 그 다음 linear DNA, 가장 느린 것이 open circular DNA이다.

목차

1.실험제목
2.RESULT
3.고찰 및 생각
4.질문 및 조사 의문점
5.참고문헌

본문내용

DNA의 크기에 따라 사용하는 젤의 종류도 다른데 크기가 작은 것을 분리 할 때는 Agarose gel보다 polyacrylamide를 사용한다. 이는 agarose gel보다 격자가 작아 , 더 작은 물질을 분리할 때 용이하기 때문이다.TBE는 우리가 실험을 하지 않았지만 PCR(중합효소연쇄반응)을 하기 위해서는 꼭 알아둬야 할 것 같아서 다시 한번 생각해 본다. 그리고 GEL의 농도를 0.8% Agarose로 하였는데,여기서 농도를 증가 시키면 반응은 느리게 일어 날것이다. 그리고 buffer를 위에 넣었 는데그 이유는 DNA의 증발을 막고, gel이 마르는 것을 방지하는 효과가 있기 때문에 이것을 한번 더 생각 해보 아야 한다. 그리고 우리가 사용하는 MARKER의 기능은 DNA의 위치가 어디 있는지 확인하고, 크기를 확인 하는 것인데, MARKER 안에는 크기를 표시하는 것이 어느 크기까지 나타날 수 있나요? Marker마다 크기가 다 정해져 있는 건가요??
그리고 EtBr은 햇빛에 노출되면 분해 된다던데, 분해 되면 완전한 기능을 잃는 건가요?? 아니면 특정한 기능만 잃는 건가요?? 그리고 효소를 관에 넣었을 때 그 부분을 손으로 만지면 온도 차이로 변성이 일어난다는데?
이유가 온도 말고도 큰 흔들림이나 다른 특정 이유는 없는 가요??
위 그림과 같이 bacillus와 litmus28과 크기 차이가 나는데 우리가 사용한 marker가지고는 bacillus를 전체 크기를 확인 할 수 없겟죠?? etbr을 5ul넣어 준뒤 또 etbr이 썩인 tae buffer를 넣어 주던데 그 이유는 많으면 더 형광을 많이 나타내서 입니까? 그리고 etbr을 안 넣고 끝난 뒤에 탈색하는 방법이 있던데? 그것과는 무슨 차이가 있습니까? 그리고 TAE에 대해서 조금 더 조사했습니다.



3) DNA의 합성(polymerization)
70°C∼74°C에서 시행하며 원하는 PCR 산물의 크기가 크거나 반응요소의 농도가 낮을 때에는 시간을 연장시키는 것이 좋다. Taq DNA polymerase는 보통 1분에 2,000∼4,000 nucleotides를 합성할 수 있으므로 원하는 PCR 산물의 크기 1 kb마다 1분 정도의 시간을 배당하면 충분히 반응이 일어날 수 있다. Cycle이 계속되면서 효소 활성이 감소할 수 있고 DNA 산물은 점점 많이 존재하게 되므로 cycle 후반부에는 반응시간을 조금씩 늘려가는 것도 좋은 방법의 하나이며, 마지막 cycle에는 시간을 충분히(10분) 주어 효소의 활성이 충분히 발휘되도록 한다.
위 과정이 계속 반복하여 진행되면서(보통 25∼35회) 원하는 DNA 부분을 증폭시키는 것이 중합효소 연쇄반응의 원리이다.
★ BamHI와 HindⅢ를 왜 사용하는 이유???
BamHI 와 HindⅢ는 자르는 부위가 틀리고 이것으로 자르면 G+C가 많이 남아 있어 그 함량을 알 수 있어 나중에 결합온도를 예측 할 수 있는데 도움이 된다.
HindⅢ

참고 자료

DNA 타이핑, 인제대학교 출판부 , 정연보 , 1996년 2월, 32~34p
실험생물학 , 형설출판사 , 박원학 , 1999년 8월 10일 , 185p~188p