plasmid DNA 추출

소개글

plasmid DNA 추출하고 그 결과를 레포트로 작성함

목차

1. 실험 목적
2. 실험 재료
3. 실험 방법
4. 결과 및 논의

본문내용

1. 실험 목적

이번 실험에서는 Recombinant DNA plasmid가 들어가있는 E.coli로부터 직접 plasmid를 추출하여 분자생물학적 실험의 기본이 되는 DNA관련 실험에 대해 이해하는 것을 목적으로 한다.

2. 실험 재료

-Echerichia coli(Competent cell : DH5α), plasmid DNA(pUC19 vector
-마이크로 피펫, 소형 원심분리기, E-tube, Ice, plasmid DNA purification kit
-Buffer 조성

Resuspension buffer
50mM glucose, 25mM Tris·Cl (pH 8.0), 10mM EDTA (pH 8.0),RNase A
Lysis buffer
0.2N NaOH, 1% SDS
Neutralization buffer
5M potassium acetate, glacial acetic acid


3. 실험 방법

1) colony 1개를 Antibiotics(예 - Ampicillin)가 포함된 liquid LB 5ml에 접종하고 37℃ shaking incubator에서 12~16시간(O/N) 키웠다.
2) Bacteria가 자란 LB중 1ml을 E-tube로 옮겼다.
3) 13,000rpm 60초간 원심분리하고 상층액을 완전히 버렸다.
4) Resuspension buffer 5ml에 RNase A 250㎕를 넣은 용액 250㎕넣고 vortexing을 하여 pellet을 완전히 풀어주었다.
5) Lysis buffer를 250㎕넣고 5~6회 inverting해주었다.
(주의-gently inverting하고 lysis 시간은 5분을 넘어서는 안 된다.)
6) Neutralization buffer를 350㎕넣고 9~10회 inverting해주었다.
7) 13,000rpm에서 10분간 원심분리 하였다.
(기다리는 동안 column을 collection tube에 꽂았다)
8) 상층액을 column에 옮기었다. (주의-pellet이 딸려오지 않게 한다)
9) 12,000rpm에서 1분간 원심분리하고 collection tube에 있는 용액을 버린다.
10) Washing bufferA 500㎕를 넣고 1분 원심분리하고 collection tube의 용액을 버렸다.
11) Washing bufferB 500㎕를 넣고 1분 원심분리하고 collection tube의 용액을 버렸다.
12) 빈 collection tube에 column을 끼우고 13,000rpm에서 1분 동안 원심분리 하였다.
13) column을 E-tube에 옮기고 50㎕의 elution buffer를 넣은 후 1분간 방치하였다.
14) 13,000rpm에서 1분간 원심분리 하였다.

참고 자료

1) Campbell, `생명과학‘, 바이오 사이언스, 2008
2) 네이버 www.naver.com
3) 서울대학교 생명과학부 ‘mini prep’ 핸드아웃