미니프랩, mini prep 실험 레포트
- 최초 등록일
- 2010.08.24
- 최종 저작일
- 2009.12
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소개글
mini prep 실험 레포트 입니다.
A+ 레포트입니다.
목차
Abstract
Introduction
Materials & Methods
Data & Result
Discussion
Reference
본문내용
Abstract
이번 실험은 Mini-preparation을 통해 E.coli의 plasmid DNA를 추출하고, 추출한 plasmid DNA를 제한효소를 통해서 검증하는 실험이었다. mini prep은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법으로 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다. chromosomal DNA와 plasmid DNA 둘 다 DNA이므로 성질이 유사하여 분리하기가 쉽지 않지만, chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear 형태가 되고, 크기가 크다는 성질을 이용하여 분리할 수 있다. 본 실험에서는 alkaline lysis를 이용한 방법을 사용하였다. 원심분리를 통해서 culture에서 모은 E.coli cell에 solⅠ,Ⅱ,Ⅲ를 넣어서 lysis 시키고, 99.9% EtOH를 넣어서 DNA를 침전시킨다. 70% EtOH를 넣어서 washing을 하고 37℃에서 dry를 하고 DNA를 DIW에 녹여서 E.coli에서 DNA만을 얻는다. 추출한 DNA를 RNAse A, 제한효소 등을 처리해서 RNase treantment only, double cut(BamHⅠ,HindⅢ)를 만든다. 그리고 전기영동을 하여서 밴드가 형성되는 위치에 따라서plasmidDNA와 chromosomal DNA를 구분해 낸다.
실험결과 <figure. 5>를 보면 uncut RNase only의 데이터는 band가 나오지 않았고, double cut을 처리한 lane에 선명하게 두 개의 band가 3.0kb와 1.2 kb에 존재하는 것을 볼 수 있었다. 이로써 제한효소 처리가 잘 되었다는 것을 알 수 있다. 또한 uncut 실험에서의 오차는 실험 과정 시 RNase 농도를 적절히 맞추지 못한 것 등의 여러 원인이 있었음을 추측할 수 있다.
Introduction
<Figure. 1 - Denaturation & Renaturation>
Plasmid DNA의 분리는 형질 전환 균주가 가지고 있는 plasmid에 존재하는 내성 유전자에 상응하는 항생물질이 들어간 선택 배지에서 균주를 배양하면 plasmid를 가지고 있는 형질 전환 균주는 항생 물질이 존재하는 배지에서 살아남는다. 형질 전환 균주를 액체 배지 상에서 적당한 세포수로 배양한 후 회수해서 plasmid를 얻을 수 있다. 세포를 끓이거나 (Boiling method), alkali를 처리할 경우 (Alkaline lysis) 세포막이 용해되면서 세포 내에 존재하는 plasmid가 세포 밖으로 나오게 된다. 이러한 처리를 거친 후 원심분리를 통해 세포 잔여물을 제거하면 plasmid가 다량으로 녹아있는 수용액을 얻을 수 있다. 이 수용액에
참고 자료
없음