젖산균 검경(그람염색&카탈라아제 검경)

소개글

젖산균 검경(그람염색&카탈라아제 검경)

목차

없음

본문내용

1. 제목 : 젖산균 검경 (gram staining과 catalase test)
2. 원리
이번 실험은 저번에 배양한 미생물을 그람염색과 catalase test를 이용하여 검경하는 실험을 했다. 미생물을 검경하는 방법엔 그람염색과 catalase test, oxidase가 있지만, 이번 실험에서는 oxidase를 하지 않았다.
그람염색에는 4가지 시약이 사용되고 원리는 다음과 같다. 먼저 1차 염색시약으로 Crystal violet의 염기성 시약을 사용하며 이에 의해서 모든 세포는 보라색으로 염색된다. 그 다음 Crystal violet 시약을 세포에 강하게 고정시키기 위해 매염제로 Iodine solution 시약을 사용한다. 이는 1차 염색시약과 결합하여 불용성 화합물인 Crystal violet-iodine(CVI) complex를 형성하여 세포에 더욱 강하게 고정시키며 모든 세포는 짙은 자줏빛을 띠게 된다. 특히 그람 양성균은 세포벽 중의 Magnesium-ribonucleic acid가 CVI complex와 결합하여 Mg-RNA-CVI complex가 형성되는데 이것은 CVI complex보다 세포에 더욱 강하게 결합되어 제거하기가 더욱 어렵다. 여기에 탈색제로 지방용해와 단백질 탈수작용이 있는 95% 에틸 알코올을 사용하여 탈색시킨다. 이는 세포벽중의 지방 함유량이 높은 그람 음성균은 지방이 알코올에 녹아 세포벽에 큰 구멍이 생기고 세포벽 단백질의 탈수가 어느 정도 진행된다. 따라서 CVI complex가 쉽게 세포벽에서 떨어져 나오면서 세포벽은 무색이 된다. 반면, 세포벽에 지방 함유량이 낮은 그람 양성균은 지방이 알코올에 의해 용출되어 미세한 구멍이 생겨 알코올에 의한 탈수작용은 막을 수 있다. 이로 인해 Mg-RNA-CVI complex는 제거되지 않고 여전히 보라색을 띠게 된다. 마지막으로 대응염색제로 Safranin을 사용한다. 이 시약은 이미 탈색된 세포에 대하여 염색이 된다.
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참고 자료

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