electrophoresis

소개글

electrophoresis

목차

Propose
Materials
Method
1. 전기영동 장치의 조립 및 Gel 제조
2. 단백질 분리
Running buffer
Results and Discussion
Reference

본문내용

Propose
Electrophoresis 원리 이해하고, SDS – PAGE 분리 기전을 이해하자

Method
1. 전기영동 장치의 조립 및 Gel 제조
1) Gel 판을 다음과 같이 조립한다.
(조립한 다음, DW를 넣고 새는 부분이 있는지 확인한다.)
2) 아래의 표에 따라 12.5 % separating gel과 3.9 % stacking gel을 만든다.
3) 제조된 solution을 잘 조립된 gel 판 안에 채운다.
(이때 공기가 들어가지 않도록 조심해야 한다.)
4) 채워진 gel solution의 경계면을 공기와 접촉을 막고, 말끔하게 만들기 위해 소량의 isopropanol을 경게면에 흘려준다.
5) 10~20분 gel이 굳어진 것을 확인하면 위에 isopropanol을 제거한다.
6) separating gel 용액을 만들고 gel 판에 가득히 분주하고 comb를 장착한다.
7) 20~30분 정도면 gel이 굳어진다.
8) gel이 완전히 굳어지면 캐스터와 comb을 제거한다.
9) 지난주 실험의 sample을 이용하며, 침전이 일어나 있으면 가볍게 up&down하여 섞어준다.
10) 5㎕의 마커와 15㎕의 샘플을 만들어서 제조된 Gel 안에20㎕씩 well에 분주한다.
2. 단백질 분리
1) Gel 판을 전기영동 kit에 setting한다.
2) kit안에 running buffer를 넘치지 않게 채운다.
(이때 위의 buffer가 샐 수 있기 때문에 반드시 확인한다.)

참고 자료

5주차 수업내용 PPT 자료
생물물리, 기기분석
단백질체학
분자세포생물학 실험노트
http://rarorilove.blog.me/30037801010