동결 세포주의 해동 및 생존 세포수 측정

소개글

동결 세포주의 해동 및 생존 세포수 측정 실험

목차

1. Purpose
2. Principle
가. 세포동결
나. 보관
다. 해동
라. 생존실험

3. Apparatus & reagents

4. Procedure

5. Results & Discussion

6. References

본문내용

눈금의 테두리에 동물세포가 걸려있는 경우에 세포수를 세는 방법이 몇 가지 있는데, 흔히 사용되는 방법으로 눈금의 테두리에 ㄴ자나 ㄱ자 모양을 그려서 ㄴ자나 ㄱ자에 들어가는 세포만 세는 것이다. 눈금의 테두리 4곳에 있는 세포를 모두 세면 세포를 두 번 세는 경우가 생기므로 이를 예방하기 위해 눈금의 테두리 4곳 중 일정하게 2곳 선택하여 ㄴ자(왼쪽과 아래)나 ㄱ자(위와 오른쪽)를 그리면서 세포수를 세는 것이다.
현미경 하에서 cell counter를 이용하여 cell의 개수를 측정한다. Hemocytometer를 현미경 하에서 관찰하면 위의 그림과 같은 grid를 볼 수 있다. 오른쪽 그림과 같이 크게 아홉 개의 square가 있으며 각각의 square는 가로 세로가 1 mm인 정사각형이다. 흔히 네 귀퉁이의 모서리에서 cell 개수를 세고 평균을 구한다. Tryphan blue 염색에 의하여 죽은 세포는 짙은 푸른색으로 염색이 되나 살아있는 세포는 염색이 되지 않으므로 살아있는 세포수만을 측정한다.
1 한 칸 당 들어있는 셀 개수가 50~100개, 대략 200-2,000 cells/ml 되게 한 후 측정하는 것이 좋다. 그 이상인 경우 정확도가 떨어지므로 더 희석하는게 좋다. 그래서 처음 실험계획에서는 1/4배 희석이었으나 실험결과의 정확도가 떨어져서 우리 실험 때는 1/8로 희석배수를 더 높여서 진행시킨 것이다.

참고 자료

6. References
(1) Grout B, Morris J, McLellan M, Cryopreservation and the maintenance of cell lines. Trends Biotechnol. 8:10 293-7, 1990
(2) James C. Covault, Cryogenics. Biomedical Product. Forma Scientific Company Catalogue. 1995
(3) R. Ian Freshney, Culture of animal cells : A manual of basic technique. 3rd ed. Alan R. Liss, Inc. 1994