[동물자원과학실습 면역학실][서울대] Apoptosis중인 cell을 FACS를 이용하여 counting

소개글

[서울대학교]
면역학실에서 실험한 레포트로서,
MCF-7 Cell line(유방암 Cell line)을 가지고 한 실험으로, apoptosis과정을 진행중인 cell과 apoptosis가 완료된 cell의 개수를 count하는 것이다.

이를 위해 Apoptosis(예정세포사)와 FACS에 대해서 조사했고, 실험결과를 분석했다.

목차

1. 조사한 내용
① Apoptosis
② FACS
2. 실험 결과에 대한 Discussion
3. 참고문헌

본문내용

이번 실험은 MCF-7 Cell line(유방암 Cell line)을 가지고 한 실험으로, apoptosis과정을 진행중인 cell과 apoptosis가 완료된 cell의 개수를 count하는 것이다. 실험 하루 전에 MCF-7 cell line에 과산화 수소를 처리한다. 이는 과산화수소로 apoptosis를 유도하는 것이다. 이로인해 Apoptosis가 진행중인 cell의 경우 plasma membrane이 먼저 붕괴가 되고 이로 인해 membrane phospholipid phosphatidylserine(PS)가 노출되게 된다. 이 PS의 경우 우리가 실험과정에서 첨가해 줄 annexin V(conjugated to fluorochromes including FITC)가 binding 하게 된다. 이를 통해 FACS로 검출 시, annexin V가 binging된 cell은 apoptosis 중인 cell로 알 수 있다.
반면 apoptosis가 끝난 cell의 경우 DNA가 밖으로 노출되게 되는데, 여기에는 propidium iodide(PI)가 binding하게 된다. PI는 intercalating agent이면서 형광물질로, DNA를 염색할 수 있다. 위와 같은 방법으로 apoptosis 된 cell은 FACS를 통해 PI를 확인 할 경우 알 수 있게 된다. 만일 apoptosis가 안 일어난 cell의 경우 FITC, PI 모두 검출되지 않을것이다.

참고 자료

① 동물자원과학실험 8주차 실험 실습자료
② BRIC 실험 (http://www.bric.postech.ac.kr/labinfo)
③ Cecie starr 외 2명, 생명과학, 라이프사이언스, 2008
④ Lewis 외 2명, 생명과학 길라잡이, 라이프사이언스, 2005
⑤ David L.Nelson 외 1명, Lehninger Principle of biochemistry, 5th edition, 2008
⑥ http://images.the-scientist.com/content/figures/0890-3670-040719-41-1-1.jpg