ames test

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예방약학 실험 ames test 실험 과정 결과 및 디스커션입니다.

목차

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본문내용

1.Title : 유전독성 및 발암성 test(Ames test)
2.Date : 2010. 11. 17
3.Name
4.Reagent & Apparatus
glucose minimal 배지,05mM histidine 용액(여과멸균), 0.5mM biotin용액(여과멸균), benzene-a-pyrene용액, s-9 mixture분획
5.Method
1.하루전날 nutrient broth에 10ml에 salmonella thphumuriumTA1535균주를 배양한다.
2.glucose minimal 배지를 100ml을 조별로 만들어 멸균 후 petridish 5개에 부어 평판 배지를 만든다.
3.preincubation with mutagen:실험은 1.5ml miccrocentrifuge tube에서 실시한다. 돌연변이 유발 물질에 미리 60분 정도 노출시켜 변이 유발을 유도한다. 이때 시험군인 B(a)P 처리군은 각각 동일한 균주에 대해 duplicate로 실험한다.
negative control
positive control
TA1535
균 배양액
0.3ml
0.3ml
0.3ml
pot.phospathbuffer
0.2ml
0.2ml
-
B(a)P
-
-
0.1ml
s-9
-
-
0.1ml
incubate at 37˚C for 60min
preincubation이 끝난 시험관에(반응액 0.3ml) 다음과 같이 supplement를 첨가한다.
negative control
positive control
TA1535
균 전배양액
0.5ml
0.5ml
0.5ml
8000rpm에서 1분간 원심분리 후 상등액을 버린다.
0.5mM Histidine
0.1ml
-
0.1ml
0.5mM Biotin
0.1ml
-
0.1ml
pot phosphate buffer
-
0.2ml
-
glucose minimal 배지
nutrient 배지

참고 자료

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