뷰렛반응

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뷰렛반응

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1)원리
뷰렛(NH₂-CO-NH-CO-NH₂)은 알칼리성 황산구리( CuSO₄)와 반응하여 보라색의 착화합물을 만든다. 두 개 이상의 펩티드 결합을 가진 화합물도 마찬가지로 유사한 착화합물을 만들며 단백질의 경우에는 청자색 또는 적자색을 나타낸다. 이 원리를 이용하여 단백질을 정량한다. 보통 이 방법으로는 약 1~10mg의 단백질을 정량할 수 있지만, 미량 뷰렛법은 약 0.25 ~ 2.0mg 까지 정량할 수 있는 감도를 가진다. 착화합물의 색은 1~2시간동안은 안정하지만, 그 이상의 시간에서는 점점 색도가 증가한다.
2) 시약 및 기구
단백질 표준 용액(소의 혈청 알부민), 뷰렛시약(NH₂-CO-NH-CO-NH₂), 미지 시료용액, 분광광도계, 실험관, 피펫, 비커, 볼텍스 믹서
3) 실험방법
① 뷰렛시약 만들기- CuSO₄· 5H₂O 0.3g, 타르타르산나트륨칼륨 0.9g을 50ml의 0.2N NaOH 용액에 용해시키고, 이에 KI 0.5g을 추가한 후 0.2N NaOH 용액을 가하여 100ml로 만든다.
② 시험관 8개에 각각 단백질 표준용액, 미지시료요액 및 물을 다음과 같이 취한다.
시약

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