염색체 표본제작과 FISH

소개글

염색체 표본제작 레포트입니다.
염색체 표본제작과 FISH 사용법 등에 대해 상세히 기술했습니다.

목차

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본문내용

혈액 종양의 염색체 표본제작
골수의 경우, 배양시간이 길어질수록 비정상세포주들을 얻을 수 없기 때문에 배양하지 않고 직접법을 이용해서 염색체를 회수하거나 1일 내지 2일 정도의 단기배양을 이용해 염색체 검사를 시행한다.
1. 시약준비
1) RPMI 제조 : 3차 증류수 1L에 RPMI 1640 media 10.4g을 넣고 3~4시간 stirr로 mix 후 HEPES(6g)을 넣은 후 1시간 30분 stirr로 mix 후 NaHCO(2g)을 넣고 20~30분 후에 0.02㎕ membrane을 이용해 filter한다.
2) supplement media (working solution) 제조
3) colcemid
4) 0.075M KCl
5) Carnoy`s fixative (methanol 3 : glacial acetic acid 1)
6) Methotrexate(MTX)
7) thymidine
8) fluorodeoxyuridine(FDU)
2. 세포 배양 단계
- 24시간 배양 기본적으로 시행, 고정도분염(high resolution culture)방법 선택 병행
1) 골수 천자액 5~10㎖ 정도를 무균적으로 heparin tube에 채혈
2) 백혈구 수를 측정한 다음 세포 수가 2×106/㎖이 되도록 검체 량을 계산하여 RPMI 1640 working 배지 10㎖에 무균적으로 접종
3) culture flask의 뚜껑을 느슨하게 열어서 37℃, 5% CO배양기에 24시간 배양
3. Harvesting
1) colcemide 단계
- colcemide(colchicine 제제) : 세포주기를 중기에서 멈추게 하기 위해 세포분열에 필요한 방추사의 형성을 억제
① 24시간 후에 10㎍/㎖ colcemide를 100㎕ 첨가하고 10분간 더 배양

참고 자료

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