[생물학]【A+】Gram Stain

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Gram stain의 시초
덴마크 물리학자 겸 의사인 Hans Christian Joachim Gram (1853-1938)에 의해 1884년에 고안된 특수 염색법
베를린에서 결핵원인에 대해 관찰하려고 균을 염색하다가 발견
세균을 분류 동정하는데 가장 중요한 기준
그람 양성균과 음성균을 구별하는 염색이기에Differential stain이라고도 한다.
Gram stain의 정의
대표적인 대조염색법(counter staining) 기법의 하나
Gram stain은 가장 널리 이용되는 박테리아 염색법
분별염색이라 하는 이유는 박테리아를 그람양성과 음성으로 나누기 때문.
각종 검체 및 배양집락의 현미경 검사에 이용, 미생물 감염 여부 조기 진단 가능.
초기 염색액이 균을 탈색했음에도 불구하고 그대로 가지고 있는 것을 그람양성이라고 한다.
탈색 과정에서 초기 염색액을 잃고 대조 염색액을 갖는 것을 그람음성이라고 한다.
최근 여러 가지 방법이 제안되었으며 Hucker의 방법과 Burke의 방법이 일반적으로 사용된다.
Gram stain의 종류
염색순서
Hucker 방법
Carbol-fuchsin 방법
Kopeloff 방법
시약
시간
시약
시간
시약
시간
1.염색제
Crystal violet
30초
Crystal violet
30초
alkaline
crystal violet
2-3분
2.매염제
Gram iodine
30초
Gram iodine
30초
Kopeloff iodine
≥2분
3.탈색제
Acetone-alcohol
≤5초
95% ethanol
≤30초
Acetone-alcohol을
3:7로 섞은 시약
도포후
즉시 세척
4.대조염색
Safranin 또는
0.1-0.2% basic
fuchsin
30초
Carbol-fuchsin
또는 0.8% basic fuchsin
≥1분
Kopeloff의
safranin
10-30초
Hucker 변법
① 슬라이드 글라스에

참고 자료

미생물 실험서, 한국 미생물학회편-을유문화사
미생물학, 아카데미서적 -최호영저
미생물학 실험, 신광문화사 오계헌외 2명
의학미생물학, 한우리 - 전국의과대학 교수
일반미생물학 5판, 라이프사이언스 - 김경민외 6명
http://hankukm.com.ne.kr/GramStain.htm
http://cpl.yonsei.ac.kr/micro/textbook/tex5-1/htm#top
미생물학, 아카데미서적-Stanier, R.Y 외 3명