Transformation&mini-prep

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Transformation &
Mini - Prep
2007010804
1. Pre-report
주 제 : Transformation과 Mini-prep 및 Mini-prep의 확인
목 적 : Transformation과 Mini-prep과정을 수행하고 학습한다.
원리 및 이론 : Transformation을 통해 원하는 DNA 부분을 플라스미드에 넣어 자라게 하고, 자란 부분을 Mini-prep하여 원하는 부분만을 purification 할 수 있다. 이 때, Mini-prep확인을 통해 원하는 부분만을 추출했는지를 확인한다.
시약 및 실험장치
< Transformation >
① -70℃에 보관된 competent cell(XL1-Blue)을 ice에 넣어준다.
② recombinant plasmid 준비.
③ Transformation - competent cell 200㎕ + recombinant plasmid 1㎕.
④ ice에 30분간 cold shock.
⑤ 42℃ 90초 heat shock.
⑥ ice에 1~2분 incubate.
⑦ LB 800㎕ 넣고 37℃ 1시간 shaking incubate.
⑧ tube를 꺼내어 12000rpm에서 1분간 centrifuge.
⑨ 상층액을 약간만 남긴 후 따라내고 resuspension.
⑩ 고체배지에 spreading 한 후, 37℃ overnight incubate.
< Mini-prep ( DNA-spinTM Plasmid DNA Perification Kit )

.
.

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