[기초유전학실험]3.PCR (Polymerase Chain Reaction)

소개글

실험서입니다.

목차

1. Abstract

2. Introduction
1.역사적 개요
2. 기본원리와 과정
3. PCR시 고려할 사항
4.PCR의 응용

3. Material & Method
1) materials
2) methods

4. Result

5. Discussion
(1) 결합능
(2) 특이성
(3) 2차구조
(4) Primer의 상호작용
(5) 증폭산물의 위치
(6) Primer의 길이

6. Reference

본문내용

3. PCR시 고려할 사항

① Pipetting & templete
여러 component를 혼합할 때에는 시료 간에 오염이 되지 않도록 주의하여야 하며 가능하면 공기를 통한 오염을 방지할 수 있는 tip을 사용하는 것이 좋다. 반응물 혼합 시에는 tube를 ice상에 두고서 혼합하여야 상온에서의 잘못 primer annealing에 의한extention을 방지할수 있다. →이론적으로 Taq DNA polymerase는 최적 온도 이하에서도 반응이 어느 정도 진행되므로 상온 등에서 정확하게 annealing되지 않은 primer에 의한 임의의 반응이 진행됨으로써 원하는 size의 product 이외의 non-specific product가 만들어질 수 있다

② Setting up the Laboratory
PCR은 민감도가 뛰어난 실험이기 때문에 아주 적은 양의 DNA가 오염되더라도 실험에 큰 영향을 미칠 수 있다. 그러므로 PCR을 위한 templete를 준비하는 곳과 PCR 반응ㅇㄹ 하는 곳, 그리고 PCR후 전기영동 및 분석을 하는 곳은 격리시키는 것이 좋으며, DNase와 RNase free PCR tube를 사용하는 것이 좋다. 모든 시약류는 반드시 autoclave와 filteration을 거친 후 사용해야 한다.

③ PCR cycling program
PCR cycling 조건은 PCR의 종류와 주형 DNA, primer 그리고 PCR 기기 등에 따라 달라져야 한다.

a. Initial denaturaion : templete DNA의 완전한 denaturation이 중요한데 94℃~95℃에서 2-3min 정도로 충분하지만 대부분 5min 정도 초기 변성 시간을 주는 것이 좋다. denaturaion이 충분하지 않으면 primer의 annealing 과 extention이 방해받아 정확한 반응물이 생기지 않을 수 있다.

참고 자료

Brock의 미생물학 제11판. MICHAEL T.MADIGAN외 저. 오계헌 외 역. 월드사이언스 2006
PCR 실험의 원리와 응용 . 최용락 외. 세종출판사.2003
알기 쉽고 재미있는 분자생물학 (3판) Molecular biology .이명석 외 역. 라이프사이언스 2007
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