[minipreparation] minipreparation

*찬*

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minipreparation of plasmid DNA은 소량의 plasmid DNA를 빠르고 쉽게 분리해 낼 수 있는 방법이다. plasmid DNA를 가진 cell에 SDS를 첨가한 후 높은 pH를 유지시키면 DNA는 SDS에 의해 denaturadion 된다. 이 상태에서 pH를 중성으로 낮추어주면 plasmid DNA는 renaturation되고 chromosomal DNA는 되지 않는다. 여기에 potassium acetate를 첨가하면, denaturated chromosomal DNA와 protein, SDS는 complex를 이룬다. 따라서 이를 centrifugation 시키면 plasmid DNA를 분리해 낼 수 있다. 이를 precipitation 시키려고 ethanol로 씻어주고 ethanol로 씻은 것을 speed vac에 넣어 DNA를 얻는다. 여기에는 RNA도 함께 있기 때문에 TE/RNaseA를 사용해 DNA에는 손상을 입히지 않고 RNA만 Lysis 시킨다. 이 과정을 통해 소량의 순수한 DNA를 검출해낼 수 있고 이를 minipreparation of plasmid DNA이라 한다. minipreparation of plasmid DNA은 보기에는 쉬워 보이는 실험이지만, 실제로 실험을 할 때는 세심한 주의를 필요로 하는 실험이었다.

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