Western blot protocol (웨스턴 블롯 방법)

소개글

1. Sample 제작
2. Protein 농도측정 (Bradford Assay)
3. Loading 시료 만들기
4. gel 만들기
5. 1D electrophoreosis
6. Transfer
7. blocking
8. 1st antibody
10. 2nd antibody
12. ECL Rx
13. expose to X-ray film

목차

1. Sample 제작
2. Protein 농도측정 (Bradford Assay)
3. Loading 시료 만들기
4. gel 만들기
5. 1D electrophoreosis
6. Transfer
7. blocking
8. 1st antibody
10. 2nd antibody
12. ECL Rx
13. expose to X-ray film

본문내용

1. Sample 제작
① -70℃의 falcon tube속의 간 조직을 200㎎정도로 분쇄한 후 새로운 falcon tube에 담 아서 liquid nitrogen이 담긴 사발에 넣어 가져 온다. (25-50mg/200㎕)
② Liquid nitrogen으로 얼려진 사발 속에 휴지로 간을 살짝 덮은 후 큰 덩어리를 작게 파쇄하고, 휴지를 제거하고 더 작은 덩어리로 만든다.
③ 분쇄된 가루를 15ml falcon tube에 담아서 얼음위에서 solution으로 만든다.
④ 만들어진 solution을 Glass homogenizer에 넣은 후 봉을 회전(좌우) 시키며 균질화 시 킨다. (이때 얼음위에서 20회 정도를 실시한다.)
⑤ 균질화 된 solution을 10min간 얼음위에서 방치(4℃)

참고 자료

없음