생화학실험보고서 (PCR을 이용하여 MFG-HSVtk로부터 HSVtk 유전자의 대량 생산)

소개글

PCR을 이용하여 특정 유전자를 대량 생산해보는 실험이었습니다.
PCR의 원리와 각종 용어의 정의가 포함되어 있습니다.

목차

1. 실험 제목
2. 실험 일시
3. 실험 목적
4. 실험 재료 및 기구
5. 실험 이론과 원리
6. 실험 방법
7. 실험 결과

본문내용

5. 실험 이론과 원리
· PCR(Polymerase chain reaction)
- 원리 : 중합효소 연쇄반응은 이미 알려진 특정 DNA 부위를 두 개의 primer를 이용하여 특이적으로 반복 합성하여 시험관 내에서 원하는 DNA분자를 증폭시키는 방법으로서, 미량의 DNA를 106배의 다량의 DNA를 얻을 수 있는 기법이다. 이 방법을 사용하여 genomic DNA와 같은 거대한 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 일반적으로 사용되는 agarose gel이나 polyacrylamide gel 상에서 뚜렷하게 보이는 띠로 가시화 할 수 있다.
- 과정
1단계 : denaturation of template DNA
90˚C~96˚C에서 dsDNA를 ssDNA로 분리시킨다. 온도가 높을수록 denaturation이 쉽게 일어나지만 taq polymerase도 온도가 아주 높 은 상태에서는 activity가 감소할 수 있다.
2단계 : annealing
50˚C~60˚C에서 primer 염기 서열의 GC 비율에 따라 온도에 변화 를 준다. taq polymerase가 template에 결합하여 새로운 dsDNA가 생성되기 시작하는 단계이다.
3단계 : extension
70˚C~74˚C에서 DNA 중합 반응을 진행한다.

참고 자료

없음