실험보고서3-bradford assay`

소개글

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목차

1. Date
2. Title
3. Purpose
4. Principle
5. Materials
6. Methods
7. Results
8. Discussion
9. Reference

본문내용

1) bradford assay
- 원리 : 산성용액에서 coomassie brilliant blue 염료는 단백질과 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대 흡광도(λmax)는 465nm에서 595nm로 이동하게 된다. 따라서 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하게 된다. 이 방법은 발색반응이 2분 이내에 완결되며, 1시간 까지 안정성이 유지된다.
Bradford 방법의 감도는 Lowry 방법보다 좋으며, 미량정량법(microassay)을 사용하면 1~20μg의 단백질량을 측정할 수 있다. Bradford 방법은 빠를 뿐만 아니라 비단백질 성분들에 의한 방해도 거의 없다. 측정에 방햇ㅇ분으로 알려진 것은 Triton X-100과 황산도데실나트륨(SDS)이다.


2) 단백질의 정량
모든 종류의 단백질의 농도를 결정할 수 있는 완벽한 방법은 지금까지 알려져 있지 않다. 따라서 단백질의 양을 정량하기 위해서는 단백질의 본질, 단백질 시료에 있는 다른 성분들의 본질, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라서 적당한 방법을 선택하여야 한다. 단백질을 정량하는 데 자주 사용되는 방법들은 다음과 같다.

비우렛 시험(Biuret test)
두 개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 화합물들은 알칼리성 용액에서 묽은 황산구리로 처리하면 자주색을 띠는 물질을 생성한다. 색깔은 구리원자와 두 개의 펩티드 사슬에서 오는 네 개의 질소원자들 사이에서 배위 화합물이 형성되므로써 생기는 것으로 생각되고 있다. 비우렛 시험은 모든 단백질에 대해서 재현성이 꽤 좋으나 비교적

참고 자료

1) 한국생화학회, 1997, 실험생화학, 개정 3판, 탐구당, p. 176-178, 205