[생화학 실험보고서] Protein over expression in E. coli and purification by affinity chromatography

소개글

E. coli sysytem을 이용하여 protein을 과발현시키고 affinity chromatography로 정제하는 실험입니다.

목차

1. 목적
2. 원리
3. 시약 및 기자재
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

5) Affinity chromatography
i) Bead나 resin에 연결된 specific ligand에 binding하는 능력의 차이에 따라 물질을 정제
ii) Ligand는 solid support에 covalently attached 되어 있음.
iii) Ligand와 binding하지 못하는 protein은 column에서 씻겨 내려가며 binding한 protein은 free ligand를 포함하는 elution solution을 이용하여 분리해낸다.
iv) 가장 보편적으로 이용되는 affinity chromatography의 한 종류는 6X-Histidine tag을 이용하는 것이다.
6) 6X-Histidine tagged protein
- 6X-Histidine tagged protein은 N, C terminal end에 hexa-Histidine이 연결되어 있는 단백질을 말한다.
- 6X-Histidine tag은 작고 uncharged되어 있으며 대부분 protein folding에 영향을 주지 않는다.
- NTA (nitrilotriacetic acid) agarose는 nickel ion의 6개의 binding site중 4개를 채우며 나머지 2개의 binding site는 6X-Histidine tag이 채우게 된다.
- Histidine의 imidazole ring part가 nickel ion과 결합한다.

참고 자료

1) 생화학실험(2) 실험교본, 교육과학기술부의생명특성화사업단.
2) Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Lubert Stryer. 2007, Biochemistry, sixth ed.
3) http://en.wikipedia.org/wiki/