Purification of His-tagged proteins,단백질의 정제

소개글

단백질의 정제, Purification of His-tagged proteins

목차

1. 단백질 정제의 목적
2. 단백질의 추출
3. 단백질의 분획
4. 단백질의 분리

본문내용

단백질 정제의 목적
세포를 구성하는 단백질은 모두 혼재된 상태로 존재하기 때문에 이들 각각의 구조와 기능을 연구하기 위해서는 우선적으로 연구하고자 하는 단백질을 정제해야만 한다.
정제의 기본은, 생리활성이나 기능을 지닌 목적 단백질을 가능한 최고의 회수율, 최고의 생물학적 활성유지, 최고의 순도로 얻는 것이다.

단백질의 추출
정제의 초기단계로써 최종 회수율을 결정짓는 가장 중요한 포인트이다.
세포질에 존재하는 가용성 단백질 추출 : 초음파처리
세포막에 존재하는 막 단백질의 가용화와 추출
내재성 막 단백질 : triton X-100, NP-40 등 계면활성제 이용
표재성 막 단백질 : 초음파 파쇄, 희석한 계면활성제 등

<중 략>

단백질의 분리(Ni-NTA affinity column chromatography)
Affinity chromatography는 정제하려고 하는 단백질에 특정한 표지(tag)를 한 후, 그 표지와 특이적으로 상호 작용하는 물질을 resin에 붙여서 그 물질을 정제하는 방법이다.
우리가 사용한 것은 resin은 Ni-NTA이며, His-를 tagging한 단백질에 사용한 것이다. His-tag는 6개를 붙이며 이 tag는 크기가 작고, 전하를 거의 나타내지 않아 일반적으로 구조나 단백질의 성질에 영향을 거의 주지 않는다.
Histidine을 resin이 붙잡고 이와 구조가 비슷한 Imidazole의 양이 많아지면 Histidine과 니켈의 결합이 약해져 tagged protein이 elution된다.

참고 자료

없음