[실험보고서] Transformation

소개글

E.coli의 transformation 실험을 통해서 유전 공학에 많이 쓰이는 transformation의 기작을 이해하고, 그 방법을 익힌다.

목차

◇실험의 목적◇
◇실험방법◇
◇실험의 원리◇
◇결과 및 토의◇
◇참고◇

본문내용

◇실험의 목적◇
E.coli의 transformation 실험을 통해서 유전 공학에 많이 쓰이는 transformation의 기작을 이해하고, 그 방법을 익힌다.

◇실험방법◇
1) 미리 준비해 둔 competent cell과 DNA(pUC 18)를 조심스럽게 섞는다.(※vortex금지. 손으로 살짝 쳐서 섞어준다.)
2) ice에 30min 동안 넣어둔다.
3) 미리 맞춰둔 heat block(42℃)에서 2min 처리하여 heat shock를 준다.
4) 다시 ice에 2min 동안 넣어둔다.
5) flesh한 LB broth를 800㎕를 넣고 잘 섞어준다.
6) 37℃에서 30min동안 incubation한다.
7) LBA(LB+Ampicillin) plate에 X-gal, IPTG와 함께 도말한다.

◇실험의 원리◇
형질전환(TRANSFORMATION)
형질전환이란 수용세포에 노출된 DNA가 흡수, 통합, 발현되는 과정을 나타내며 몇몇의 박테리아 사이에서 자연적으로 일어나는 현상이다 (예로 Stretococcus와 Bacillus). 대장균을 포함한 다른 종은 외부DNA를 흡수할 능력이 없다. 이러한 한계점을 극복하기 위해서 수용세포로 DNA를 삽입하기 위한 인공적인 방법이 고안되었고 수많은 실험생물에 적용되었다. 움직이게 할 수 있는 DNA의 2번째 방법인 형질전환은 1928년 Fred Griffith에 의해 발견되었다. 형질전환은 유전자 형태에서 수용성 Chromosome의 분자 중간물과 합성된 물질인 드러난 DNA분자나 단편에서 이루어진다. 자연적인 DNA형질전환은 박테리아를 줌으로써 온다. 이 과정은 무한적이며 유전자의 어떤 부분도 박테리아 사이에서 형질전환 될 것이다. 박테리아가 섞이면 그들은 주위환경의 대부분의 DNA를 풀어놓는다. 이 단편들은 아마도 비교적 크고 여러 유전자를 내포하고 있다. 만약 이 단편이 반응성이 있는 세포와 접촉하면 DNA를 끌어들여 형질전환을 할 수도 있다.

참고 자료

http://kbiotec.kijeon.ac.kr/pro_master/Lee_sun_hee
Lodish, Baltimore, Berk, Zipursky, Matsudaira, Darnell, Molecular Cell Biology, Third edition(1995), Scientific American Books, NewYork
http://www.msd-korea.com/msdkorea
http://www.takara.co.kr