2조 단백질_정량(BCA법) (2)

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본문내용

실험목적
단백질 정량법의 하나인 BCA 방법을 이해하고
샘플내의 단백질의 양을 BCA 방법으로 정량해
본다.

실험이론 - 정량법
*정량법 :
물질을 구성하는 양적관계를 명확하게 하는 분석법의 총칭.
일반적으로 정성분석에 의해 물질을 구성하고 있는 성분을
알고 난 다음 정량분석이 행해진다. 분석방법에 의해 분류하면
물리화학적인 기계, 기구들을 사용해서 수행하는 기기분석과
화학반응을 이용해서 성분의 양을 결정하는 화학분석으로
크게 나누어진다. 기기분석은 조작이 간단해서 정밀도가 높고,
개인차가 적다.
*정성법 :
시료가 어떤 성분으로 구성되어있는지 알아내기 위한 방법

<중 략>

실험방법 ? BCA reagent A 제조
* BCA reagent A 용액
10g BCA (1%)
+ 20g Na2Co3H2O(2%)
+ 1.6g Na2C4H4O62H2O(0.16%)

+ 4g NaOH(0.4%)
+ 9.5g NaHCO3(0.95%)
증류수를 통해 전체량을 1L로 한다. 필요한 경우 NaOH 나
NaHCO3를 이용하여 pH를 11.25로 조정한다.

실험방법 ? BCA reagent B 제조
* BCA reagent B 용액
2g CuSO45H2O(4%) 증류수를 통해 전체량을 50ml로 한다.
BCA reagent A와 B를 50:1 비율로 혼합하여 섞는다.

실험방법 1
① BSA를 50ug/ml, 100ug/ml, 150ug/ml, 200ug/ml, 250ug/ml
정도로 희석시키고, protein sample 5ul + 증류수 45ul을 준비
한다.
② 50 용량의 BCA 시약(A)와 1용량의 BCA의 시약(B)를 혼합
한다.
③ sample을 100ul씩 glass 시험관 또는 plastic 계의 sample
tube에 옮기고, A시약을 1ml 첨가하여 vortex mixture한다.

참고 자료

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