PCR(Polymerase Chain Reaction)

소개글

PCR(Polymerase Chain Reaction)

목차

1. Polymerase Chain Reaction(PCR)
2. PCR 구성요소
3. PCR의 원리
4. Primer 설계상 주의 할 점
5. PCR 실험 방법
6. PCR 각 성분에 대해 고려할 점

본문내용

Polymerase Chain Reaction(PCR)
중합효소 연쇄반응(PCR)은 유전자를 증폭하는 방법 으로 이미 알고 있는
일부의 염기서열 중 특정 DNA 부위를 반복 합성하여 원하는 DNA 분자를
증폭시키는 방법이다. 이 방법은 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은
양의 DNA합성이 가능하므로 아주 획기적인 것이라 할 수 있다
전반적인 방법은
1. Primer 제작 후, PCR을 통해 원하는 부분의 DNA를 선택적으로 증폭
2. electrophoresis(전기영동)을 통해 결과를 Band의 형태로 관찰.
(전기영동은 agarose gel이나 polyacrylamide gel 에PCR 증폭산물을
Loading하고, 전류를 흘려주어, 증폭산물이 전류를 따라 흘러, 증폭한 사
이즈에 맞는 band의 형태를 확인하는 것을 말한다. )
이때 PCR은 보통 25~ 35 cycle로 실시하는데, 30 cycle의 경우 230 만큼의
DNA가 증폭하게 된다. 즉 PCR을 통해 특정 부위의 DNA를 수 시간내에 어마어
마하게 증폭시킬 수 있으며, 이렇게 증폭된 DNA를 여러가지 실험에 이용할 수
있고, 실험 결과를 토대로 여러 의학적인 연구에 응용할 수가 있다.

<중 략>

PCR 각 성분에 대해 고려할 점
1. Template DNA
2. Primer
3. dNTP (deoxynucleotide triphosphate)
PCR의 효율, 특이성 면에서 보면 20~200 μM에서 양호한 결과를 얻을
수 있다. DNA polymerase가 잘못된 dNTP를 사용하는 mismatch 현상은
dNTP 농도에 강하게 의존한다. dNTP 농도를 낮추는 쪽이 PCR 특이성과
정확도가 높아지므로 dNTP 농도를 낮추면 misprimming이 감소하여 PCR
의 정확도가 높아진다. 단 사용하는 Mg2+ 농도에 따라 dNTP의 최적농도
가 달라지므로 주의가 필요하다.
4. Taq DNA polymerase
Taq DNA polymerase가 잘못 들어간 nucleotide를 삭제하고 다시 합성하
는 proofreading 기능(3`→5‘ exonuclease activity)이 없기 때문이다. 따라
서 PCR 산물에서 유전자의 변이가 발견되더라도 반드시 확인과정을 거
쳐야 한다.

참고 자료

없음