Western Blotting&SDS Page 실험보고서

목차

1. 제목
2. 실험의 목적
3. 실험의 원리
4. 실험 재료
5. 실험 방법
6. 실험 결과
7. 참고사항

본문내용

1. 제목 : Western Blotting&SDS-Page
2. 실험의 목적
Western Blotting을 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질만을 찾아낼 수 있다.
3. 실험의 원리
전기영동 기술은 생체 용액에 있는 개개의 단백질 성분을 분리하는데 기본적인 기술이었다. 종이나 전분(starch), agarose등이 단단하고, 반응성이 없으며, 대류성이 없어서 전기 영 동 기술에 많이 이용되었으나 현재는 polyacrylamide가 전기영동의 대부분에 이용되고 있다. 그러나 이 재료의 우수성만으로는 특정 단백질의 검출에는 이용할 수 없다.

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polyacrylamide gel은 미세한 구멍이 있어서 전기장 내에서 분자 형태, 크기, 전하량에 따라 고분자를 이동시키고 분리한다. 보통 SDS-PAGE는 두가지의 다른 gel이 붙어있는 상태인 Disc (dis-continuous pH 또는 disc) gel 전기영동으로 시행한다. 이를 사용하면 단백질 시료가 gel 에 apply되었을 때 모든 시료가 같은 점에서 출발할 수 있도록 압축이 되고, 그 다음에 성질에 따라 분리되게 된다. 이 전기 영동법은 glycine과 Tris-HCl에 의한 수소 이온농도 구배를 가져서 단백질이 가진 음전하량에 따라 보다 효과적으로 단백질을 분리할 수 있다. SDS-PAGE에서 단백질은 고유한 3차 구조를 잃고 linear 상태가 되어 순전히 분자량에 따라 분리가 된다

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6. 실험 결과
Western blotting은 여러 가지 단백질들은 포함하고 있는 세포 또는 조직의 추출물을 전기 영동하여 그 속에 들어 있는 단백질을 크기별로 구분한 다음 흡착지에 옮겨 놓고 조사하고자 하는 단백의 항체와 결합시켜 그 단백질의 존재와 유무 크기 등을 밝히는 검사로 면역 블로팅이라고도 한다.
발색이 완료된 후 증류수에 세척한 결과 흐릿하지만 밴드를 읽을 수 있었다

참고 자료

http://kaykong.blog.me/130025402893
http://xerxgus.blog.me/70025867724