소 간 원신구배법 핵 미토콘드리아

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세포분획법

세포를 세포 안의 각각의 구성 요소로 분리하는 방법으로 세포기관 등의 기능과 화학조성을 조사하기 위해 실시한다. 호모지나이저(균질기)를 사용하여 동식물의 조직을 짓이겨 세포를 파괴하여 얻어지는 현탁액을 호모제네이트라고 한다. 이 호모제네이트 속에서 각 세포 안의 구성요소를 크기?밀도?모양 등에 따라 분획한다. 분획법으로는 원심분획법과 밀도기울기원심법이 이용된다

크기에 따라 세포를 분획하는 방법으로는 원심분획법을 사용한다. 원심분획법이란 호모제네이트에 원심력의 세기를 점차 변화시키면서 큰 세포기관부터 분획하는 것이다. 원심력의 세기가 커질수록 미토콘드리아, 마이크로솜, 리보솜, 원형질의 과립성분 순으로 침전된다.
좀 더 정밀하게[ 분획하기 위해서는 밀도의 차이를 이용하는 밀도기울기원심법을 사용한다. 이 방법은 크기가 일정하지 않은 세포기관을 정밀하게 분리하고자 할 때 쓰인다. 세포의 핵은 다른 세포기관에 비해 비중이 매우 크므로 농도가 높은 설탕용액 속에서도 침전하는 성질을 이용하여 분획한다.

<중 략>

실험 방법
1. 약 3gram의 소 간을 잘라 beaker에 넣고 무게를 측정한다.
2. 30ml의 sucrose-buffer solution을 beaker에 넣고 가위로 간을 잘게 자른다.
3.작은 조각으로 자른 소 간이 담긴 30 ml의 sucrose-buffer 용약을 homogenizer의 mortar에 넣는다.
4. 30ml의 sucrose-buffer solution을 beaker에 넣고 가위로 간을 잘게 자른다.
5. 전동모터에 장착한 pestle (Teflon-coated)을 회전시키면서 위아래로 약 10회 정도 올리고 내린다
6.소 간 조직 덩어리가 모두 부서져 균질액이 되면 2개의 원심분리 튜브에 같은 부피(무게)로 넣고 세로 무게가 같은가를 확인하다.(천칭사용) (각 조별로 균질액 30ml를 원심분리 튜브에 따라 넣고 다른 조의 튜브와 무겔ㄹ 동등하게 맞춘다.)
7. 4℃, 1000g에서 10분간 원심분리한다.(rpm 2,000, rotor 8; =19cm)
8. 원심분리가 끝나면 상등액을 다른 원심분리 튜브에 pellet이 부서져 따라 나오지 않도록 조심스럽게 따른다.

참고 자료

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