PCR을 이용한 곤충의 DNA 염기서열

목차

1. 실험 목적
2. 실험재료
3. 실험방법
4. 실험 결과

본문내용

1. 실험 목적
곤충 DNA의 분석하고 이것을 PCR을 이용해서 증폭해 염기서열을 알아 기존의 것과 비교해본다.

2. 실험재료
곤충 샘플, 1.5ml tube, microPipet, Tips, Rack, Centrifuge, Water bath, Gel Tray, UV Box, Grinding Stick, Isopropanol, EtOH, Nuclei Lysis Solution, Protein precipitation solution, DNA rehydration solution, 6x loading dye, Primer, PCR premix ,PCR기기, LB agar배지, ampicillin, Clean bench, Solution I,II,III, 삼각유리봉, 알코올램프, 이쑤시개 등

3. 실험방법
(1) 나방을 냉동보관한다.(DNA와 RNA가 파괴되지 않기 위해서)
(2) 1.5ml 튜브에 Nuclei Lysis solution을 100㎕을 넣고 나방 몸통을 넣는다.
(3) Grinding stick을 이용하여 몸통을 으깨준다. (Nuclei Lysis solution이 절대 묻지 않게 조심한다.)
(4) 잘 갈리면 Nuclei Lysis solution을 500㎕를 추가로 넣는다. (미리 넣으면 분쇄할 때 넘칠 수 있다.)
(5) 56℃에서 3시간 동안 incubate 한다.
(6) Protein precipitation solution 200㎕을 투여한한다.

<중 략>

(63) 10000rpm으로 5분간 원심분리로 cell을 모은다.
(64) 250㎕ buffer(sol1)를 추가한다. (sol1에 RNase를 추가한다.)
(65) 뭉쳐진 cell이 없을 만큼만 voltexing한다.
(66) 250㎕ buffer(sol2)를 넣고 튜브를 서너번 뒤집는다.
(67) 350㎕ buffer(sol3)f를 넣고 튜브를 뒤집어주면 하얗게 뭉치는 것이 생긴다.
(68) 얼음에 5분간 꽂아둔다.
(69) 12000rpm에서 5분간 원심분리한다.

참고 자료

없음