미생물 실험 결과 report Reaction kinetics of Alcohol dehydrogenase

소개글

미생물 실험 결과 레포트입니다~
실험 과정, 결과, 디스커션 상세합니다
레포트 점수 A 받았습니다

목차

1 Purpose
2 Materials
3 Procedure
4 Observation & Data
5 Discusison
6 Question
7 Reference

본문내용

Procedures
[ Alcohol Dehydrogenase 효소의 준비 ]
- Cell Cultivation
1. E.coli BL21(DE3)-(pACYCduet-ADH-His) colony를 따서 전배양한다.
(30 ℃, 200 rpm overnight)
2. 다음 날 아침 50 ㎖ LB broth에 1 ㎖ transfer 한다.(37 ℃, 200 rpm 으로 배양)
3. E.coli의 O.D 값이 0.6에 다다랐을 때, induction : IPTG 0.1 mM (30℃,200rpm14시간배양)
- Cell Harvest
- Cell lysis using a sonicator

[ NADH assay ]
1. Pipet과 e-tube등 필요한 기구들을 준비한다.
2. Spectrophotometer를 340nm로 setting 한다.
⇒ 340nm에서는 NAD+의 O.D 값이 0이고, NADH의 O.D 값은 더 크기 때문에 NADH의 O.D 값만을 가지고 Discussion 할 수 있기 때문이다.
3. 효소의 경우 온도에 민감하므로 ice에 준비한다.
4. Buffer 용액에 Alcohol Dehydrogenase Enzyme을 넣자마자 실험이 시작 되므로 Substrate를 첨가하여 바로 Spectrophotometer에서 O.D를 측정 할 수 있도록 한다.
5. 300초 동안 NADH에 대한 변화하는 흡광도를 측정한다.

Results
실험 결과 얻은 기질농도 [S]에 대한 흡광도 O.D Graph 2개는 다음과 같다.
Graph 1,2를 통해서 실험 결과 O.D 가 증가하는 것을 보아 생성물의 양 [P]는 시간에 따라서 증가하게 되는 것을 알 수 있었다. [P]가 증가할수록 용액의 O.D가 증가하기 때문이다.
Graph1을 통해서는 생성물의 농도 [P] = O.D 는 시간이 지나면서 커지는 반응이 진행되는 것을 알 수 있었다. 그리고 D9에서의 증가 추이를 보면 초기에는 급격히 반응이 진행되고 그 이후로는 완만하게 생성물이 생성되는 반응이 진행되는 것을 알 수 있었다.

참고 자료

없음