조직공학 실험

목차

1.Introduction
2.Method
3.Results
4.Discussion
5.Reference

본문내용

1. Hepatocyte와 Fibroblast의 Co-culture
로 전체의 70%를 잘라 내도 2, 3개월 후면 원상태로 돌아온다. 반면 일단 체외로 나오게 되면 간 조직은 잘 증식하지 않고 생존하더라도 분화되지 않아 그 기능을 다하지 못하는 특징을 가지고 있다. 따라서 조직공학에서는 체외에서 조직을 배양, 증식하여 체내로 이식하고자 하는 많은 연구들이 진행 중이다.
In-vitro에서 hepatocyte의 높은 기능을 유지하기 위해서 배양 환경의 최적화와 배지에 호르몬이나 성장인자 등을 첨가하는 등의 많은 연구가 진행 중인데 그 중에서도 간조직의 parenchymal cell 인 hepatocyte와 non-parenchymal cell간의 co-culture 법이 있다. 생체조직은 단일 세포로만 구성 된 것이 아니라 주된 기능을 맡은 parenchymal cell 와 그 주위를 둘러싸며 다양한 영향을 끼치는 non-parenchymal cell로 구성되어 있다. 간 조직에서도 총 세포수의 70%만이 hepatocyte로 이루어져 있고 나머지 30%는 간 내의 혈관을 이루는 endothelial cell이나 면역을 담당하는 Kuffer cell과 hepatocyte 중간 중간에 위치해 비타민 A의 저장을 맡고 있는 Ito cell 등 다양한 세포 종으로 이루어져 있다. 따라서 co-culture 방법은 실제 생체를 구성하는 장기와 조직의 구조에 기인된 것이라 할 수 있다.

< 중 략 >

Method
Hepatocyte isolation, Coculture
0. Hepatocyte 를 배양하기 위해서 세포가 분리되기 30min-1hr 전에 배양용기 바닥에 collagen 을 미리 coating 해두기.
collagen 을 배양 용기 바닥에 사전 부착 시 Hepatocyte 가 잘 붙고 잘 자란다.
1. Hepatocyte isolation 을 위한 Perfusion 장치 setting
Perfusino 장치를 이용하여 지속적으로 산소를 공급한다.
2. Rat 마취
3. 마취된 rat 은 수술대에 고정, 배 부위에 포비딘을 바르고
4. 복부 절개 후 간으로 들어가는 정맥이 잘 보이도록 면봉으로 다른 기관들을 정리
5. Pump 를 틀어서 KRB + EDTA solution 를 틀어두고,
KRB 는 buffer 용액이며, EDTA 는 항 응고제로 간의 혈액 세척과 응고 방지 역할을 한다.

참고 자료

S. N. Bhatia, U. J. Balis, M. L. Yarmush, and M. Toner. Microfabrication of Hepatocyte/Fibroblast Co-cultures: Role of Homotypic Cell interactions. Biotechnol. Prog. 1998, 14, 378-387.
Kuri-Harcuch, W., Mendoza-Figueroa, T. Cultivation of adult rat hepatocytes on 3T3 cells: Expression of various liver differentiated functions. Differentiation 1989. 41 (2), pp. 148-157.