결과.Selection and culture of recombinant Escherichia coli

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험이론
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 실험고찰
7. 참고자료

본문내용

1. 실험제목
Selection and culture of recombinant Escherichia coli

2. 실험목적
rDNA를 E.coli에 도입시켜 transform 시키고, 이를 선별해 봄으로써 DNA에 의한 형질전환 현상을 이해한다.

3. 실험이론
Transformation(형질전환)이란 DNA를 bacteria 세포 내로 주입하는 과정을 말한다.
eukaryote에서 DNA를 세포 내로 주입하는 transfaction 방법에는 여러 가지 방법이 있으나 실험에서는 Cemical method 중 Calcium phosphate를 이용한 competent cell을 이용한다. CaCl2로 처리하여 competent cell로 만들면 plasmid가 cell에 들어갈 수 있게 된다. Heat shock을 가하면 plasmid 가 cell 안으로 들어가는 효율을 증가시킬 수 있다. 실험에 사용할 XL1-Blue는 tetracylin에 대한 저항을 가지며 transformation 효율이 좋다는 장점이 있다.
실험에 사용하는 vector인 pBluescript II SK(+)의 특징으로 ampicillin resistance gene(AmpR)이 들어 있다. 이런 경우 여기서 나오는 단백질은 beta-lactamase이다. 이 것을 이용하여 E. coli 의 colony를 선택할 때 transform이 되지 않은, 즉 플라스미드가 들어있지 않은 cell을 선택적으로 제거할 수 있다. LacZ를 이용한 방법으로, LacZ의 MCS에 DNA가 재조합되지 않은 박테리아의 colony는 LacZ가 제기능을 발휘하여 X-Gal을 대사시키므로 푸른 색이 되고, DNA가 재조합된 박테리아의 conony는 LacZ가 망가져서 기능하지 않아 X-Gal이 그대로 남아 있어서 흰색 colony가 된다. 이렇게 색깔의 차이로 DNA가 plasmid 에 들어가서 세포 내에서 증폭되어 기능하는 것을 확인할 수 있다.

참고 자료

http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_18.php (연세대학교 의과대학 생화학-분자생물학교실)
http://blog.naver.com/mungsun2080?Redirect=Log&logNo=60022327624 (ligation&transformation 이후 no colony.. 이유는?)
분자 생물학 실험서, 김영희, 월드사이언스, 2008.
생명과학대사전, 강영희, 아카데미서적, 2008.