결과.단백질 전기영동과 Gel staining, western blotting
- 최초 등록일
- 2013.05.09
- 최종 저작일
- 2011.10
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목차
1. 단백질 전기영동과 gel staining
2. 면역발색법 (Western blot)
본문내용
1. 면역 발색 결과를 첨부하고 결과를 분석하시오.
윗쪽의 이미지는 CK에 대한 면역발색 결과이다. 번갈아가며 MB,MT를 한쌍으로 모두 5개의 조가 실험 한 모습이다. MB에서는 대체적으로 CK가 많이 검출되지 않았고, MT에서 훨씬 많이 나타났다.
두번째 이미지는 actin에 대한 면역발색 결과이다. 마찬가지로 MB, MT 순으로 5조의 실험결과인데 MB, MT 둘 다 actin에 대해서는 반응이 잘 되었지만 MT가 조금 더 크게 검출 되었다.
2. Transfer를 한 후 transfer가 잘 되었는지 확인 할 수 있는 방법에 대해 서술하시오.
transfer를 하는 도중 거품이 발생하는 것이 눈으로 확인 된다면 정상적으로 transfer되고 있다는 의미이다.
transfer가 끝난 후 membrane에 단백질이 잘 붙었는지 확인 하기 위해 PonceauS stain을 해 본다.
3. 면역발색 결과 여러 band가 나왔다. 우리가 검출하기 위해 사용했던 항체가 인식하는 단백질과 다른 크기의 band는 어떻게 설명할 수 있을까? 또, 이것을 줄일 수 있는 방법에 대해 설명하시오.
항원 항체 반응에서, 항체는 보통 항원의 비교적 작은 영역을 인식하기 때문에 의외로 교차반응이 나타날 수 있고, 전혀 관계없는 단백질과 반응 할 수도 있다. 이런 문제들은 항체의 희석률, 특이성에서 기인하거나 전기영동에 쓰인 단백질 량이 너무 많은 경우, 혹은 block이 잘 되지 않았을 경우를 생각해볼 수 있다. 각 경우에 대하여 항체의 농도검정을 다시 측정해 보거나, 단백질량을 줄여보기, bloking을 overnight 해보는 것이 좋다.
4. 면역발색 결과 검출된 신호의 강도가 낮았다. 가능성 있는 원인은 무엇이고 해결방법을 생각하여 서술하시오.
이 역시 3번과 비슷한 원인이 있을 수 있다. 항체의 희석률이 잘 맞지 않거나, block이 약할 경우 혹은 항원으로 작용해야 할 단백질의 양이 적을 경우 등이 있다. 해결방법으로는 일,이차 항체의 농도 검정을 다시 해보고, blocking 시간을 늘리고 일차항체를 overnight으로 반응 시켜 본다. 또 단백질 양을 증가시킨 후 실험해 본다.
참고 자료
단백질실험노트 상•하, 2006, 김승호 외1 역, 월드사이언스
레닌저 생화학, 2006, David L. Nelson, 백형환 역, 월드사이언스