[미생물실험]플라스미드추출 DNA preparation

목차

1. introduction
2. Material and Methods
3. Results
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. introduction
• DNA preparation :
① 세포벽 , 외막, 세포막 제거
② 단백질 제거 ⟹ DNA만 추출
③ Chromosomal DNA 제거 ⟹ Plasmid DNA 획득

• Plasmid와 Chromosomal DNA의 분리원리

<중 략>

② Size에 기초한 분리
Chromosomal DNA는 Plasmid DNA보다 훨씬 크다


• Alkaline Lysis method : 일반적으로 많이 사용하는 방법
① 세포막을 유지시키되 세포벽을 분해한다. 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물질은 EDTA 이며, 이때 sucrose나 glucose가 첨가되어 세포의 형태를 유지하도록 한다. 때로는 lysozyme을 쓰기도 한다.
② 세포막을 조심스럽게 깨서 크기가 큰 chromosomal DNA 가 너무 잘게 조각나는 것을 방지하면서 DNA를 용액에 노출시킨다. SDS등의 detergent가 세포막을 녹여버리면서 안에 있던 세포내용물이 용액으로 흘러나오게 되는 것이다. 이때 alkali용액에 노출된 chromosomal DNA와 plasmid DNA 모두 denature된다. 그러나 크기가 작은 supercolied plasmid DNA의 structure는 상대적으로 덜 denature된다.
③ pH를 급격히 7.0까지 복구시키면 크기가 작고 supercolied form을 유지하고 있던 plasmid는 비교적 renaturation이 잘 되지만, chromosomal DNA는 미처 renature되지 못하고 엉기게 된다. 이렇게 엉긴 chromosomal DNA를 원심분리로 제거한다. 그러면 상층액에 plasmid DNA가 있게 된다.

참고 자료

http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_20.php
http://blog.naver.com/withcoffee67?Redirect=Log&logNo=70160635571