E.coli배양(결과보고서)

목차

1. 시약 및 기구
2. 실험방법
3. 실험결과
4. 토의
5. 감상

본문내용

1. 시약 및 기구
1)시약
-LB(Luria Bertani) Broth : LB Broth란, 배지 중 특별히 합성된 균이 잘 자랄 수 있는 배지로 단백질의 트립신 부분 분해물인 trypton, 효모 추출물인 yeast extract와 NaCl을 섞어 만든 배지이다.
-Agar : 해조나 우뭇가사리로 만드는 수산 제품. 끓이면 투명하고 물렁물렁해진다. 과자·한천지 따위를 만들거나 요리할 때에 쓰며, 등사판 인쇄 중에 한천판(寒天版) 인쇄 재료로도 쓴다.
-증류수
-Ampicillin : 항생제의 일종으로 세포벽 합성에 관여하는 여러 효소에 붙어 그 합성을 저지한다.
-Competent cell(PH 5α) : 대장균에 처리하여 플라스미드의 도입이 쉽도록 만들어진 대장균 competent cell이다.
-Ampicillin 내성 유전자 가진 plasmid(HSP)
2)기구
-페트리 접시. 마이크로피펫, 도말봉, e-Tube, 원심분리기, Incubator, water bath, ice bath, conical tube, 알콜램프
2. 실험방법
A. Transformation(1~8번 과정)
1. Competent cell(PH5α)를 미리 ice bath(410호 ice maker)에서 녹여준다.
(반투명상태이어도 녹은 것임, 약 10분 정도 녹이면 됨.)
2. Competent cell(PH5α)에 Plasmid(HSP) 2.0 ㎕를 넣는다.
3. 2번을 ice bath에 5 min 동안 넣어둔다.
4. Water bath(테이블 위 하늘색 작은 직사각형 기기)에서 42 ℃에서 45 sec 동안 둔다.
(기기의 온도는 맞으나 시간이 오차가 있으므로 초시계 이용. e-tube를 동동이에 꼽아둔다.)
5. 10 min 동안 ice bath에 넣어둔다.
6. LB media(412호 냉장고 문 중간칸) 900 ㎕를 넣는다.
7. 37 ℃ Incubator의 아래칸에서 180 rpm으로 1 hr 동안 shaking 한다.
(e-tube를 동동이에 끼운채로)
8. 검정색 micro-centrifuge(13000 rpm)를 3 min 한다.

참고 자료

없음